اسپرموگرام AFK. موفقیت های علوم طبیعی مدرن. گونه های اکسیژن انزال بومی و واکنشی

18.09.2014

ناباروری و استرس اکسیداتیو در مردان: نقش رژیم غذایی ، سبک زندگی و مکمل های غذایی.

استفان برودی ، دکتر ، دکتر مدیر انستیتوی فن آوری های پیشرفته تولید مثل؛ استادیار بالینی سابق ، دانشکده پزشکی ، دانشگاه کالیفرنیا ، سن دیگو ، سن دیگو ، کالیفرنیا.

چکیده

تقریباً هر پنجمین زوج از نازایی یا ناباروری رنج می برند. در سراسر جهان ، تعداد اسپرم ها کاهش تعداد اسپرم ها را نشان می دهد. عوامل محیطی ، تغییر در سبک زندگی و تغذیه می تواند تأثیر منفی بر روند اسپرماتوژنز داشته باشد. در اکثر بیماران ، ناباروری مردان و کاهش تعداد اسپرم ایدیوپاتیک است. خصوصیات عمومی ظاهراً این موارد افزایش استرس اکسیداتیو و اختلال عملکرد متابولیکی است. آنها عمدتا می توانند اسپرم نابالغ و گلبول های سفید خون را تحت تأثیر قرار دهند. محتوای بالای اسیدهای چرب اشباع نشده چندگانه همراه با فسفولیپیدها در غشای اسپرم ، آنها را در معرض آسیب پراکسید قرار می دهد. در نتیجه پارگی یا آسیب به غشا ، عملکرد اسپرم تحت تأثیر قرار می گیرد. این فرایند منجر به اختلال در عملکرد اسپرم ، تغییر در پارامترهای تجزیه و تحلیل منی ، تکه تکه شدن DNA و اختلالات عملکردی می شود که توانایی نفوذ اسپرم ها و تعامل آنها با تخمک را تحت تأثیر قرار می دهد. جالب توجه است ، تحقیقات نشان داده است که آنتی اکسیدان ها و سایر ریز مغذی های مشابه می توانند استرس اکسیداتیو را کاهش دهند ، و در نتیجه عملکرد اسپرم را بهبود می بخشند. مکمل های غذایی بهینه شده برای بهبود کیفیت اسپرم باید در تمام موارد ناباروری مردان و همچنین ناباروری بدون دلیل توصیه شود.

مقدمه

در روال عمل بالینی تجزیه و تحلیل مایع منی برای ارزیابی عملکرد تولید مثل مردان استفاده می شود. تجزیه و تحلیل اساسی شامل تعیین غلظت اسپرم ، تحرک و مورفولوژی اسپرم ، حجم و وجود یا عدم وجود لکوسیت ها است. متأسفانه ، تغییرات در نتایج تجزیه و تحلیل منی تنها یک شاخص غیر مستقیم از عملکرد تولید مثل است.

تعداد اسپرم متحرک بسیار کم معمولاً نشان دهنده کاهش باروری است. با این حال ، بدیهی است که مشکل فقط در تعداد آنها نیست ، زیرا حتی یک اسپرم برای باروری تخمکی که هر ماه در بدن یک شریک زن بالغ می شود ، کافی است.

تعداد اسپرم کم و سایر تغییرات در تجزیه و تحلیل اسپرم در واقع نشان دهنده عملکرد عمیق تر اسپرم است. این اختلالات شامل تکه تکه شدن DNA ، تغییرات متابولیکی م affectثر بر اسپرماتوژنز و تاثیر منفی رادیکال های آزاد.

اسپرماتوئیدها با کمک دم حرکات فشرده ای را انجام می دهند. از بین تمام سلولهای بدن انسان ، بالاترین میزان تحرک را دارند. پیشرفت سلولهای اسپرم به جلو برای غلبه بر دستگاه تناسلی زنان ضروری است. علاوه بر این ، اسپرماتوئیدها باید توانایی عملکردی در نفوذ تخمک ها را داشته باشند. این فرایندها به سطح بالایی از متابولیسم اکسیداتیو نیاز دارند. در نتیجه ، گونه های اکسیژن فعال (ROS) ، مولکول های تک اتمی به نام رادیکال های آزاد تولید می شوند. وجود ROS نشانه پاتوفیزیولوژیک استرس اکسیداتیو است. تشکیل رادیکال های آزاد منجر به اختلال در عملکرد اسپرم می شود.

اهمیت کاهش استرس اکسیداتیو

مقادیر کم ROS تولید شده در سلولهای اسپرم در تنظیم توانایی باروری اسپرم نقش دارد. با این حال ، تشکیل رادیکال های آزاد اضافی می تواند به سلول های اسپرم آسیب برساند. در سطح بالای ROS ، کاهش تحرک اسپرم و آسیب به DNA هسته ای آنها وجود دارد. حالت استرس اکسیداتیو به یکی از دو دلیل رخ می دهد: 1) افزایش تولید رادیکال های آزاد یا 2) فعالیت آنتی اکسیدانی ناکافی برای خنثی سازی آنها.

عدم کاهش استرس اکسیداتیو می تواند به طور بالقوه منجر به ایجاد طیف گسترده ای از اختلالات شود که بر روند تولید مثل مردان تأثیر می گذارد. یکی از اصلی ترین تأثیرات پاتوفیزیولوژیک رادیکال های آزاد ، آسیب به غشای سلولی اسپرم ها توسط پراکسیداسیون لیپید است.

هدف از استفاده از آنتی اکسیدان ها جلوگیری از اثرات مضر تشکیل رادیکال های آزاد اضافی بر عملکرد اسپرم است. استفاده از آنتی اکسیدان می تواند عملکرد و پارامترهای اسپرم مانند تعداد اسپرم ، مورفولوژی و تحرک را بهبود بخشد. ...

بررسی کاکرین در مورد نقش آنتی اکسیدان ها در عملکرد تولید مثل ، افزایش تحرک اسپرم در مردان مبتلا به عدم باروری را تأیید می کند ، و همچنین افزایش چشمگیر بارداری و زایمان را نشان می دهد.

علاوه بر آنتی اکسیدان ها ، سایر مکمل های غذایی نیز بر تولید اسپرم ، متابولیسم تستوسترون ، انتقال انرژی و تحرک سلول تأثیر دارند. این ریز مغذی ها همراه با آنتی اکسیدان ها برای بهبود عملکرد اسپرم به طور کلی و افزایش پتانسیل تولید مثل کار می کنند. تغییر سبک زندگی همچنین می تواند به کاهش استرس اکسیداتیو کمک کند.

پاتوفیزیولوژی اثر استرس اکسیداتیو بر عملکرد تولید مثل مردان

متابولیسم اکسیداتیو برای اسپرماتوژنز طبیعی ضروری است. بیش از حد پروکسیدان می تواند منجر به تشکیل رادیکال های آزاد شود. استرس اکسیداتیو زمانی رخ می دهد که تولید رادیکال های آزاد بیش از توانایی آنتی اکسیدان ها در خنثی سازی آنها شروع شود. در حدود 25٪ از مردان مبتلا به ناباروری ، تجزیه و تحلیل منی افزایش سطح رادیکال های آزاد را نشان می دهد ، که توسط گونه های واکنش اکسیژن (ROS) اندازه گیری می شود.

کاهش بالقوه در گونه های واکنش اکسیژن و استرس اکسیداتیو را می توان از طریق رژیم غذایی و تغییر سبک زندگی به دست آورد. رژیم غذایی و مصرف آنتی اکسیدان ها همچنین به تقویت سیستم آنتی اکسیدان کمک می کند.

افزایش حساسیت اسپرم به گونه های واکنش اکسیژن را می توان با محتوای بالای اسیدهای چرب در غشای آنها توضیح داد. اکسیداسیون اسیدهای چرب با ایجاد اختلال در یکپارچگی و نفوذپذیری غشا of آنها ، می تواند به اسپرم آسیب برساند. آپوپتوز سلول و آسیب DNA می تواند در اسپرماتیدها و پیش سازهای اسپرم در مراحل اولیه اسپرماتوژنز و اسپرماتوژنز رخ دهد. این می تواند منجر به کاهش در تجزیه و تحلیل مایع منی از هر سه شاخص شود: تعداد ، تحرک و مورفولوژی.

در سلولهای زایای اولیه ، ROS قادر به سرکوب اسپرماتوژنز و القاop آپوپتوز است. در اسپرماتوزویای بالغ ، ROS می تواند باعث اختلال در عملکردهای اساسی آنها شود ، از جمله پاسخ آکروزومی و نفوذ تخمک. آنها همچنین می توانند به سیستم انرژی میتوکندری سلول آسیب برسانند.

اثرات فیزیولوژیکی استرس اکسیداتیو را می توان به طور متوالی در نظر گرفت (شکل):

متابولیسم پروکسیدان

1) رادیکال های آزاد بیش از حد و یا وضعیت آنتی اکسیدانی ناکافی

2) آسیب به DNA ، لیپیدها و پروتئین های سلول های زایای اولیه

3) تغییر در شاخص های تجزیه و تحلیل اسپرم: تعداد ، تحرک ، مورفولوژی

4) کاهش عملکرد اسپرم با اختلال در پاسخ آکروزومی و ظرفیت

5) ناباروری مردان

کاهش تعداد اسپرم در سراسر جهان

اهمیت تغییر رژیم غذایی و سبک زندگی و مکمل های غذایی برای مردانی که مایل به بازیابی باروری هستند نباید دست کم گرفته شود. کاهش کیفیت و غلظت اسپرم در کشورهای غربی در چند دهه گذشته ماهیت اپیدمی داشته است. انستیتوی ملی پزشکی محیط زیست 62 مطالعه انجام شده طی 52 سال تا 1990 را مورد تجزیه و تحلیل قرار داد. در ایالات متحده و سایر کشورهای غربی مشخص شده است که تعداد اسپرم در تجزیه و تحلیل منی سالانه 1.5 میلیون در میلی لیتر کاهش می یابد. در اروپا ، اوضاع حتی فاجعه بارتر است - در آنجا کاهش تعداد اسپرم 3 میلیون در میلی لیتر در سال است. این یافته ها با مطالعه 20 ساله ای که در سال 1995 خاتمه یافت ، تأیید شد و در مجله پزشکی نیوانگلند منتشر شد. همچنین در حجم مایع منی نیز کاهش می یابد.

همان عواملی که باعث کاهش عملکرد اسپرم در سراسر جهان می شود در مردان مبتلا به ناباروری یا ناباروری مشاهده می شود. برخی از دلایل رایج عبارتند از:

شکر و غذاهایی که باعث افزایش قند خون می شوند

روغن های گیاهی

چربی های ترانس و غذاهای فرآوری شده

زنوبیوتیک در مواد غذایی: آفت کش ها ، علف کش ها و قارچ کش ها ، سویا تخمیر نشده

زنوبیوتیک ها از محیط: گازها ، سموم ، محصولات پاک کننده ، کرم ها

هورمون ها ، الکل و سیگار

اضافه وزن با چاقی التهابی مرکزی

استرس ، بی خوابی و عدم تحرک بدنی

اصلاح سبک زندگی برای بهبود عملکرد باروری در مردان

در ادبیات علمی و پزشکی شواهد زیادی وجود دارد که نشان می دهد سبک زندگی و تغییر در رژیم غذایی می تواند بر باروری تأثیر مثبت بگذارد. صرف نظر از وجود یا عدم تغییر در تجزیه و تحلیل مایع منی ، تنظیمات سبک زندگی می تواند تأثیر بسزایی در توانایی تولید مثل یک مرد داشته باشد. به نظر می رسد مکانیسم کلی این اثر مفید برای کاهش استرس اکسیداتیو ، کاهش التهاب و افزایش ثبات غشا membrane چربی باشد. بهبود متابولیسم انرژی و عملکرد ریز مغذی های درون زا نیز نقش دارد.

سبک قدرت خیلی مهم. یک رژیم غذایی متعادل می تواند منجر به کاهش التهاب ، تشکیل رادیکال های آزاد و به طور بالقوه ، چند شکلی ژنتیکی شود. هدف مصرف مواد غذایی است که التهاب ایجاد نمی کنند. آنها باید دارای شاخص گلیسمی پایین و متناظر با سطح انسولین پایین باشند. از مصرف چربی هایی که باعث التهاب می شوند باید خودداری شود. میوه ها و سبزیجات مایعات ضروری را برای ما فراهم می کنند مواد مغذیکه استرس اکسیداتیو را خنثی می کند. مصرف کافی آب تأثیر مفیدی در محیط درون سلولی و بین سلولی دارد. کافئین باید محدود به یک فنجان قهوه یا دو فنجان چای در روز شود. چای سبزحاوی کافئین ممکن است اثرات مفیدی داشته باشد.

تمرین فیزیکی کمک به کاهش پاسخ التهابی بدن. آنها جریان خون ، عملکرد اندوتلیال و خاصیت ارتجاعی عروق را بهبود می بخشند. یک مرد باید روزانه حداقل 30 دقیقه به تمرینات متناوب ، متناوب با حرکات کششی و قدرتی اختصاص دهد.

سیگار کشیدن منجر به کاهش تعداد اسپرماتوزوئیدها ، نقض تحرک و مورفولوژی آنها می شود. افزایش استرس اکسیداتیو در منی ، با تکه تکه شدن بعدی و کاهش عملکرد ، می تواند به DNA اسپرم آسیب برساند.

مصرف بیش از حد الکل در بسیاری از کشورهای جهان توزیع شده است. معمولاً می دانیم که مصرف بیش از حد الکل باعث اختلال در عملکرد اسپرم می شود. این اثر می تواند متناسب با میزان الکل مصرف شده باشد. وقتی نوبت به ارواح می رسد ، فقط یک وعده در روز مجاز است.

فعالیت جنسی باید با چرخه تخمدان شریک زندگی ارتباط داشته باشد. گزارش هایی از بارداری 5 یا 6 روز قبل از تخمک گذاری وجود دارد. با این حال ، حدود 16 ساعت پس از تخمک گذاری ، احتمال لقاح تخمک به طور ناگهانی از بین می رود. مناسب ترین زمان 3 روز پس از تخمک گذاری است. با استفاده از کیت تخمک گذاری ساده و بدون نسخه ، می توانید زمان ترشح هورمون لوتئین ساز را محاسبه کنید. روز این طغیان ، و همچنین یک روز قبل و بعد از آن ، مطلوب ترین پنجره برای باردار شدن است. برای افزایش تعداد اسپرم ، نیازی نیست که مرد از رابطه جنسی پرهیز کند. تحقیقات در مورد تکرار رابطه نشان داده است که رابطه جنسی مکرر تأثیر قابل توجهی بر باروری ندارد. برخی از روان کننده های مصنوعی می توانند برای منی سمی باشند.

تأثیر مضر محیط ردیابی و شناسایی اغلب دشوار است. عوامل مضر معمول شامل علف کش ها ، قارچ کش ها ، گازهای آلی ، تشعشعات و حلال ها هستند. توانایی تداخل در تولید اسپرم نیز در تعدادی از داروها دیده شده است. تستوسترون ، DHEA و سایر آندروژن ها ، از جمله استروئیدهای آنابولیک ، یک اثر برجسته دارند. اگرچه این ترکیبات شدت خصوصیات جنسی ثانویه مرد را افزایش می دهند ، اما مستقیماً در سرکوب ترشح گنادوتروپین نقش دارند. در نتیجه ، کاهش اسپرماتوژنز وجود دارد.

گرم شدن بیش از حد ممکن است تعداد اسپرم ها را تحت تأثیر قرار دهد. بیضه ها به طور طبیعی در یک محیط خنک تر قرار می گیرند. این ترتیب باعث تولید اسپرم می شود. از منابع گرما ، از جمله صندلی های باریک دوچرخه ، وان های آبگرم ، دمای بالا ، استحمام طولانی مدت و لباس زیر تنگ یا تنگ خودداری کنید.

مکمل های استرس اکسیداتیو و اختلال عملکرد اسپرم

مردان می توانند از مکمل های غذایی برای بهبود عملکرد اسپرم استفاده کنند. مشخص شده است که این داروها بر عملکرد اسپرم ، ساختار DNA و عملکرد تجزیه و تحلیل اسپرم تأثیر مثبت دارند. از ریز مغذی های مختلفی می توان استفاده کرد.

داروهای بدون نسخه وجود دارد که تحت تنظیم مقررات بسیار کمی از سوی سازمان های تنظیم کننده مواد غذایی و دارویی قرار می گیرند. ریز مغذی ها می توانند به کاهش التهاب ، تضعیف فرایندهای خود ایمنی ، بهبود متابولیسم متوسط \u200b\u200b، فعال سازی حمل و نقل هسته ای - سیتوپلاسمی و بازگرداندن یکپارچگی غشاهای اسپرم کمک کنند. موثرترین و مهمترین کلاس مکمل های غذایی آنتی اکسیدان ها هستند. این بدان دلیل است که تشکیل رادیکال های آزاد در طی استرس اکسیداتیو نقش اثبات شده ای در اختلال عملکرد اسپرم دارد.

آنتی اکسیدان های متابولیک: ویتامین ها ، مواد معدنی ، اسیدهای آمینه ، کوفاکتورها

سیستم های آنزیمی بدن در کاهش استرس اکسیداتیو نقش دارند. علاوه بر این ، انواع ویتامین ها ، مواد معدنی ، اسیدهای آمینه و کوفاکتورها تأثیر یکسانی بر باروری مردان دارند. تحقیقات علمی نقش این مواد را در پاتوفیزیولوژی ناباروری مردان و ناباروری مردان کمی می کند. مکمل های غذایی خوراکی می توانند نقش مستقیمی در بهبود پارامترهای اسپرم ، بازیابی عملکرد اسپرم و در واقع افزایش میزان بارداری در همسران زن داشته باشند.

داروی ارتومولکولی استفاده از مکمل های غذایی برای حفظ سلامتی و غلبه بر فرایندهای بیماری است. مفهوم وی این است که بیماری ها می توانند از کمبود عناصر غذایی ریز ناشی شوند. بنابراین ، مکمل می تواند از بیماری جلوگیری کند یا تحت شرایط خاص ، آن را درمان کند. این اصطلاح توسط لینوس پاولینگ ، دو بار برنده جایزه نوبل ، ابداع شد.

استفاده از مکمل های غذایی برای بهبود عملکرد و بهبود اسپرم باروری مردان در بسیاری از مطالعات مورد مطالعه قرار گرفته است. برخی از اینها محدودیتهایی در فرم نامناسب ثبت نام ، معیارهای صحیح عدم صلاحیت ، گروههای کنترل نامناسب یا نتایج نامشخص داشتند. دیگران با استفاده از داروهای مختلف تصادفی یا بدون کنترل دارونما انجام نشدند. تجزیه و تحلیل کوکران ، که در آن این محدودیت ها در نظر گرفته شد ، نشان داد که مکمل باعث بهبود پارامترهای تولید مثل در مردان می شود.

ویتامین ها نقش مهمی در سیستم های آنتی اکسیدانی بدن دارند. ویتامین ها ترکیبات آلی هستند. با این حال ، همه ترکیبات آلی ویتامین نیستند. اساساً ، ویتامین ها در مقادیر کافی برای عملکرد طبیعی بدن ساخته نمی شوند. به عنوان مثال ، ویتامین C در بدن انسان ساخته نمی شود. و در بیشتر پستانداران که قادر به سنتز آن هستند ، ویتامین نیست. بنابراین ، یکی از ویژگی های ویتامین ها این است که آنها باید همراه غذا مصرف شوند.

ویتامین A مشتق شده از کاروتنوئیدهای موجود در سبزیجات زرد ، قرمز و نارنجی. کاروتنوئیدها در دستگاه گوارش به شبکیه تبدیل می شوند و سپس به رتینول ، اصلی ترین ترکیب ویتامین تبدیل می شوند. یک آنتی اکسیدان است و در تنظیم رشد سلولهای اپیتلیال نقش دارد. عملکردهای ویتامین A در سیستم تولید مثل مردان ایجاد ثبات در غشای اسپرم ، شرکت در تنظیم اسپرماتوژنز و افزایش تحرک اسپرم است.

ویتامین های گروه B بزرگترین گروه ویتامین های جداگانه را تشکیل می دهد. آنها به عنوان کوفاکتورهایی که در کار آنزیم ها نقش دارند ، عمل می کنند. آنها انتقال گروههای متیل ، متیلن و فرمیل را به داخل سلول تسهیل می کنند. ویتامین های گروه B مانند اسید فولیک برای سنتز DNA ضروری هستند و بنابراین با کاهش تکه تکه شدن DNA به افزایش اسپرماتوژنز و افزایش پایداری اسپرم کمک می کنند. وقتی سطح فولات کم باشد ، تعداد اسپرم و تحرک آن کاهش می یابد. پیریدوکسین ، یک ویتامین B6 ، اثر متقابل در متابولیسم هموسیستئین اضافی دارد.

ویتامین سی مهمترین آنتی اکسیدان محلول در آب در بدن انسان است. به طور کلی ، مقادیر بالای ویتامین C با بهبود تحرک اسپرم در ارتباط است. محتوای ویتامین C در منی در واقع 10 برابر در پلاسما است. از DNA اسپرم در برابر آسیب رادیکال های آزاد محافظت می کند. برای بیش از یک دهه ، تحقیقات توانایی ویتامین C را در افزایش تعداد اسپرم همراه با بهبود سایر پارامترها در تجزیه و تحلیل اسپرم ، از جمله تحرک و مورفولوژی نشان داده است.

ویتامین دی فقط یک ویتامین نیست این اثر مانند هورمون است و بر رشد سلول ، تمایز بافت و متابولیسم تأثیر می گذارد مواد معدنی... تأثیر مثبتی بر عملکرد عضلات دارد و سیستم ایمنی بدن را تقویت می کند. ارتباطی بین پیشرفت برخی از سرطان ها و کمبود ویتامین D یافت شده است. ویتامین D برای فرآیندهای طبیعی تولید مثل در مردان مهم است. مردان دارای سطح ویتامین D طبیعی در مقایسه با مردانی که کمبود این ویتامین داشتند ، از نظر تحرک اسپرم مورد آزمایش قرار گرفتند.

ویتامین E ویتامین اصلی محلول در چربی در بدن انسان است. با توجه به اینکه غشا sp اسپرم از لیپید تشکیل شده است ، ویتامین E نقش اساسی در کاهش پراکسیداسیون لیپید توسط ROS دارد. به یک معنا ، ویتامین C و ویتامین E به طور همزمان برای بهبود عملکرد اسپرم کار می کنند. ویتامین C اصلی ترین آنتی اکسیدان محلول در آب و ویتامین E اصلی ترین آنتی اکسیدان محلول در چربی است. مطالعات انجام شده بر روی مردان با میزان کم لقاح آزمایشگاهی ، بهبود قابل توجهی را پس از مصرف مکمل های ویتامین E به مدت 3 ماه نشان داده است. مصرف خوراکی ویتامین با کاهش پراکسیداسیون لیپید باعث افزایش قابل توجه تحرک اسپرم می شود. علاوه بر این ، شواهدی از افزایش میزان کلی بارداری با مکمل ویتامین E وجود دارد.

مواد معدنی و کوفاکتورها

سلنیوم یک ماده معدنی کمیاب است که می تواند استرس اکسیداتیو را کاهش دهد. در غیاب آن ، روند اسپرماتوژنز به دلیل آتروفی اپیتلیوم اسپرماتوژن مختل می شود. تغییرات پاتولوژیک در اسپرم ، ظاهراً عمدتاً در قسمت میانی و سر سلول قرار دارد. سلنیوم برای بلوغ اسپرم و رشد طبیعی بیضه ضروری است. نشان داده شده است که مکمل سلنیوم باعث افزایش تحرک اسپرم و کاهش آسیب رادیکال های آزاد می شود.

فلز روی آیا عنصر کمیاب دیگری برای تشکیل اسپرم لازم است ، که بر تحرک آنها و همچنین متابولیسم تستوسترون تأثیر می گذارد. این بخشی از بیش از 200 آنزیم است که در تقسیم سلولی ، سنتز پروتئین و متابولیسم اسید نوکلئیک نقش دارند. سطح آن در منی با کیفیت اسپرم ارتباط دارد. نشانه های روشنی از توانایی مکمل روی در ایجاد افزایش تعداد اسپرم و تحرک و همچنین سطح تستوسترون وجود دارد.

کوآنزیم Q10 محبوبیت زیادی در مطبوعات غیر تخصصی بدست آورده است ، عمدتا به دلیل مشاهده میزان آن در بیمارانی که استاتین مصرف می کنند ، کاهش می یابد. این یک آنتی اکسیدان است که نقشی اساسی در انتقال لایه های انرژی و تولید انرژی در سلول دارد. در بعضی از غذاها به مقدار کم یافت می شود. حداکثر میزان کوآنزیم قبل از 20 سالگی در انسان یافت می شود و پس از آن با افزایش سن شروع به کاهش می کند. تحقیقات جدی نشان داده است که Co-Q10 قادر به بهبود هر سه پارامتر تجزیه و تحلیل منی است: غلظت ، تحرک و مورفولوژی. در برخی موارد ، حداقل شش ماه مکمل طول می کشد تا تحرک اسپرم افزایش یابد.

هیدروکلراید بتائین یا تری متیل گلیسرول ، یک فاکتور مهم است و می تواند به عنوان اهدا کننده گروه متیل عمل کند. بنابراین ، تقریباً می تواند روی هر سلول در بدن انسان تأثیر بگذارد. این نقش مهمی در عملکرد تولید مثل دارد. هیدروکلراید بتائین به افزایش درصد اسپرمهای متحرک بعد از روشهای انجماد-ذوب کمک می کند. وقتی به محیط مغذی اضافه شود ، تأثیر مفیدی در رشد جنین در شرایط آزمایشگاهی دارد. حمل و نقل بتائین در حین لقاح فعال می شود. انتقال متیل باعث سنتز ملاتونین ، انتقال دهنده های عصبی مانند دوپامین و سروتونین و کوآنزیم Q10 می شود.

آمینو اسید

گلوتاتیون تریپپتید است. این ماده یکی از قوی ترین آنتی اکسیدان های بدن انسان است. عمل آنتی اکسیدانی آن برای جبران مجدد گروه های تیول منقبض شده توسط استرس اکسیداتیو است. گلوتاتیون قسمت میانی اسپرم را تثبیت کرده و از غشای سلول در برابر پراکسیداسیون لیپید محافظت می کند. حتی مردان مبتلا به واریکوسل هنگام مصرف مکمل های گلوتاتیون می توانند بهبود قابل توجهی در پارامترهای مایع منی داشته باشند.

ال کارنیتین، مشتق آمینو اسید ، یکی از اولین و موثرترین مکمل های غذایی است که در مردان با تغییر در تعداد اسپرم مورد استفاده قرار می گیرد. علاوه بر این که نقش مهمی در انتقال انرژی و متابولیسم انرژی ، به ویژه انتقال چربی ها دارد ، که پس از آن با آزاد شدن انرژی تجزیه می شود ، شکی نیست که کارنیتین دارای خواص آنتی اکسیدانی نیز است. به طور کلی ، دوزهای قابل توجهی از کارنیتین قادر به افزایش تحرک اسپرم است ، که عمدتا افزایش انرژی سلول را فراهم می کند. استیل کارنیتین اغلب می تواند به عنوان کمکی برای بهبود متابولیسم نسبی و فراهمی زیستی این مواد مفید باشد.

ال متیونین یک اسید آمینه ضروری گوگرد است که تشکیل پروتئین را فعال می کند. به دلیل مشتقات میانی خود ، به عنوان اهدا کننده گروه های متیل و همچنین محرک سنتز کارنیتین عمل می کند. این ترکیب سنتز فسفاتیدیل کولین و سایر فسفولیپیدها را برای حفظ یکپارچگی غشا membrane اسپرم مهم است. هنگامی که با گروه کنترل مقایسه شد ، مشخص شد که از ایجاد ناهنجاری در پاسخ آکروزومی جلوگیری می کند و به حفظ یکپارچگی غشای اسپرم کمک می کند.

ال آرژنین یک اسید آمینه بسیار مهم است. نقش مهمی در پیشگیری از حوادث قلبی عروقی دارد. این ماده پیش ماده اکسید نیتریک است ، هورمونی قوی که به صورت محلی سنتز می شود و باعث اتساع عروق ، بهبود گردش خون و تا حدی واکنش های آکروزومی می شود. علاوه بر این ، آرژنین دارای اثر تعدیل سیستم ایمنی در کاهش پاسخ التهابی و به طور بالقوه کاهش مهاجرت لنفوسیت ها و سیتوکین ها است.

درمان با مکمل اصلی اسپرم (BSS)

عناصر ریز مغذی خاصی که به صورت جداگانه در دوزهای فوق فیزیولوژیکی تجویز می شوند ، می توانند عملکرد اسپرم را بهبود بخشند. به طور منطقی ، هنگامی که این اثر کشف شد ، مواد افزودنی ترکیبی تولید می شوند تا اثرات هم افزایی ایجاد کنند. این مکمل ها به طور کلی باعث حفظ و بهبود تعداد اسپرم و باروری مردان می شوند. فرمولاسیون های چند جزئی ، نیاز به مصرف چندین قرص و کپسول مختلف را از بین می برند.

مکمل های اساسی برای بهبود کیفیت اسپرم فرمولاسیون هایی هستند که حاوی تعداد محدودی ویتامین ، مواد معدنی و آنزیم هستند. نشان داده شده است که قادر به بهبود عملکرد اسپرم هستند. معمولاً مکمل اصلی برای بهبود کیفیت اسپرم شامل دو ویتامین ، سه کوفاکتور و سه اسید آمینه است. محتوای آنها متفاوت است ، با این حال ، اغلب قابل مقایسه با مقدار استفاده شده در مطالعات تأیید اثر بخشی مکمل است.

تحقیقات علمی در مورد استفاده از مکمل های اساسی برای بهبود کیفیت اسپرم نتایج مثبتی را نشان داده است. این مطالعه 17 مطالعه را که شامل 665 مرد نابارور بود که از آنتی اکسیدان خوراکی یا دارونما استفاده می کردند ، تجزیه و تحلیل کرد. در 14 مطالعه از 17 مطالعه بهبود کیفیت اسپرم مشاهده شده است. تحرک اسپرم 17٪ و غلظت اسپرم 33٪ افزایش یافته است. در شش مطالعه افزایش میزان حاملگی گزارش شده است. اثرات مثبت بر یکپارچگی ساختار DNA و شاخص های کلی استرس اکسیداتیو اسپرم نیز مشاهده شد. مهمترین کار ، کاکرین ریویو است که موارد 2867 زوج را که در 34 مطالعه شرکت کرده اند ، مورد تجزیه و تحلیل قرار داده است. از نظر آماری افزایش قابل توجهی در بارداری و تولد زنده در زوج های نابارور مشاهده شد.

مکمل ها همچنین می توانند برای بیمارانی که از فناوری کمک باروری استفاده می کنند مفید باشند. یک مطالعه اثر بخشی یک مکمل آنتی اکسیدان را در بهبود عملکرد اسپرم در بیمارانی که قصد انجام IVF را دارند ارزیابی کرد. نمونه ها در ابتدا و 12 ماه بعد ، قبل از استفاده از فن آوری های کمک باروری جمع آوری شدند. نمونه مایع منی از 147 بیمار به دست آمد. نتایج تجزیه و تحلیل افزایش شدید تحرک و تعداد اسپرم در بیماران مبتلا به الیگواستنوتراتوزواسپرمی (OAT) را نشان داد. مکمل آنتی اکسیدانی در بیمارانی که IVF را تغییر می دهند و تغییراتی در تعداد اسپرم دارند ، تأثیر مفیدی دارد.

افزودن آنتی اکسیدان به محیط کشت در حین IVF می تواند بر سلولهای اسپرم تأثیر مثبت بگذارد. نشان داده شده است که این روش استرس اکسیداتیو ناشی از دستکاری فیزیکی سلولهای اسپرم یا انجماد را کاهش می دهد. استفاده از آنتی اکسیدان می تواند از آسیب رساندن به اسپرم کروماتین جلوگیری کند. درجه استرس اکسیداتیو در نمونه های مایع منی با تعداد دفعات لقاح بعد از IVF متناسب است. بنابراین ، افزودن آنتی اکسیدان به ماده مغذی می تواند مفید باشد.

نتایج کاربرد مکمل اسپرم بهینه شده (OSS)

یک مکمل بهینه شده با کیفیت اسپرم به نام Proceptin MX برای مردان دارای اختلال در تولید مثل و تغییر در تعداد اسپرم تولید شده است. این یک داروی اختراع شده است که یک ماده مغذی مغذی است. این ماده حاوی آنتی اکسیدان های محلول در چربی و آب ، اسیدهای آمینه و کوفاکتورهای متابولیکی است. هدف از ایجاد آن ارائه حمایت فیزیولوژیکی از عملکرد تولید مثل مردان بود (جدول). اثربخشی این دارو در کاهش میزان بارداری و ناباروری مردان در یک مطالعه علمی ارزیابی شده است.

بیماران خود گروه کنترل بودند. نتایج بدست آمده پس از استفاده از OSS با داده های پایه مقایسه شد. این مطالعه شامل دو گروه از بیماران بود: 1) مردان با شاخص های تکه تکه شدن DNA بالا (DFI) بیش از 30٪ و 2) مردان با حداقل یک پارامتر تغییر یافته در تجزیه و تحلیل منی. در گروه 1 ، یک مطالعه گذشته نگر و در گروه 2 ، یک مطالعه آینده نگر انجام شد. گروه اول شامل 45 مرد ، و گروه دوم - 62 نفر بود. همه شرکت کنندگان از نظر علت ناشناخته یا تغییرات غیرقابل توجیهی در پارامترهای تجزیه مایع داشتند. همه مردان با علل آشکار اختلال در تولید مثل از مطالعه خارج شدند.

از استانداردهای سازمان بهداشت جهانی به عنوان مقادیر مرجع استفاده شد. برای تعیین دقیق مورفولوژی از نمره کروگر استفاده شد.

برای تشخیص آنتی بادی های سطحی از یک ایمونوگرانولوتست مستقیم استفاده شد. از شاخص تکه تکه شدن DNA (DFI) به عنوان نشانگر آسیب DNA اسپرم استفاده شد که با استفاده از روش ساختاری کروماتین اسپرم (SCSA) تعیین شد.

دوز دارو 1 کپسول در روز برای تغییرات متوسط \u200b\u200bدر اسپرم و 2 کپسول برای انحراف بیشتر از حد نرمال بود. این درمان حداقل 3 ماه طول کشید. این مدت بر اساس مدت زمان چرخه اسپرماتوژنز انتخاب شد ، یک دوره تقریباً 100 روزه برای تکمیل این روند لازم است.

نتایج گروه اول:

نتایج بسیار آشکار بود. در طول 90 روز ، 10.2٪ در DFI بهبود داشته است. پیگیری های بعدی افزایش تعداد اسپرم 70٪ و تحرک 85٪ را نشان داد.

در گروه دوم ، نتایج زیر بدست آمد:

1) سن متوسط \u200b\u200b38.0 سال بود.

2) غلظت اسپرم از 22.4 میلیون در میلی لیتر به 38.3 میلیون در میلی لیتر افزایش یافته است که مربوط به افزایش 71 درصدی است.

3) تحرک اسپرم از 32٪ به 46٪ افزایش یافته است که مربوط به افزایش 43.8٪ است.

4) حجم انزال از 2.6 میلی لیتر به 4.3 میلی لیتر افزایش یافته است که مربوط به افزایش 39.5٪ است.

5) هیچ تغییر قابل توجهی در نتایج آزمایش ایمونوگلانولوتست مشاهده نشد.

6) شاخص های مورفولوژی اسپرم طبق معیارهای WHO از 2/31٪ به 4/43٪ و براساس معیارهای دقیق کروگر از 1/6٪ به 6/8٪ افزایش یافت. این نتایج به اهمیت آماری نمی رسند ، با این حال ، یک رابطه ثابت بین مصرف OSS و بهبود مورفولوژی پیدا شد.

7) حاملگی بالینی در 37٪ موارد تحت IVF تشخیص داده شد.

8) حاملگی بالینی در 18٪ مواردی که از فن آوری های کمک باروری استفاده نشده است ، تشخیص داده شد.

ارزیابی نتایج

ارتباط معنی داری بین عملکرد نشانگرهای زیستی انتخاب شده در نمونه های مایع منی و مصرف مکمل های ریز مغذی وجود داشت. این نتایج تأثیر OSS در بهبود پارامترهای تجزیه و تحلیل مایع منی و کاهش تکه تکه شدن DNA را تأیید می کند.

نتیجه گیری

ناباروری مردان ، ناباروری و تعداد غیرطبیعی اسپرم کاملاً رایج است. مشخص شده است که استرس اکسیداتیو عامل مهمی در اختلال عملکرد اسپرم است.

ثابت شده است که یک فرمولاسیون حاوی مکمل های بهینه شده برای بهبود کیفیت اسپرم تأثیر قابل توجهی بر باروری مردان دارد. با استفاده از آن ، بهبود عملکرد اسپرم و کاهش آسیب اکسیداتیو به DNA مشاهده شد. علاوه بر این ، یک مطالعه بالینی بهبود قابل توجهی در تعداد اسپرم و عملکرد کلی تولید مثل نشان داده است.

استفاده از مکمل های غذایی یک جهت منطقی در درمان همراه با رژیم غذایی ، سبک زندگی و تغییرات محیطی است. آنها هیچ عارضه جانبی یا منع مصرف ندارند. مطابقت بیمار به دلیل این واقعیت که تمام ریز مغذی ها در یک کپسول موجود است افزایش می یابد.

هدف از تولید مکمل بهینه شده برای بهبود کیفیت اسپرم ، حداکثر عملکرد آن است. مکمل بهینه باید برای همه مردان با تغییر در تعداد اسپرم یا ناباروری بدون دلیل توصیه شود. همچنین استفاده از مکمل های غذایی در مواردی که زنان به ناباروری مشکوک هستند ، منطقی است. این به این دلیل است که حتی با تجزیه و تحلیل طبیعی اسپرم ، ممکن است نقص تشخیص داده نشده ای مانند تکه تکه شدن DNA وجود داشته باشد.

مکمل باید حداقل به مدت سه ماه و ترجیحاً تا شروع بارداری در همسر زن ادامه یابد. ارزیابی تغییرات در تجزیه و تحلیل منی نیز فرصتی منحصر به فرد برای تجزیه و تحلیل سلامت یک مرد به عنوان یک کل فراهم می کند.

ادامه شواهد بالینی این نتیجه را تأیید می کند که همه مردان ، از جمله افراد بدون باروری ، باید یک مکمل بهینه شده با کیفیت اسپرم مصرف کنند. این روش نه تنها پارامترهای تولید مثل ، بلکه شاخص های کلی بارداری و باروری را نیز بهبود می بخشد. برای بهینه سازی داده ها در مورد اثربخشی کلی مکمل های غذایی برای بهبود کیفیت اسپرم ، به تحقیقات طولانی مدت نیاز است.

ناباروری آیا ناتوانی یک زوج متاهل از نظر جنسی فعال در دستیابی به بارداری بیش از یک سال بدون استفاده از روش پیشگیری از بارداری است.

تقریباً 25٪ زوج های متاهل در طی یک سال هیچ مفهومی را تجربه نمی کنند. از این تعداد ، 15٪ تحت درمان ناباروری هستند.

عامل مرد تقریباً 40٪ از دلایل ازدواج نابارور را اشغال می کند ؛ در دهه های اخیر ، کاهش تدریجی غیر قابل توضیح در تعداد اسپرم در انزال وجود داشته است. تقریباً 6-8٪ از مردان نابارور هستند. حدود 40٪ است ناباروری زنان و 20٪ مخلوط.

تشخیص ناباروری مردان:

تشخیص ناباروری مردان بر اساس ارزیابی جامع از وضعیت سیستم تولید مثل مردان است ؛ یک آندرولوژیست یک معاینه را در یک توالی خاص انجام می دهد. تشخیص ها با حداقل شروع می شوند و در صورت لزوم گسترش می یابند.

حداقل الگوریتم معاینه یک مرد با ناباروری: (این الگوریتم به شما امکان می دهد تا تشخیص را تشخیص داده و نقض توانایی لقاح در مردان را شناسایی کنید ، به شما امکان می دهد تا وضعیت تشریحی و عملکردی اندام های سیستم تولید مثل را ارزیابی کنید.

1. مشاوره (مجموعه آنامنیز ، شکایات) و معاینه توسط آندرولوژیست.

2. ارزیابی شاخص های اسپرموگرام - ارزیابی قدرت باروری مردان (کیفیت اسپرم). این نقطه شروع نیاز به اقدامات بعدی است (تجزیه و تحلیل با استمنا در یک اتاق جداگانه انجام می شود ، قبل از آن 3 روز پرهیز از رابطه جنسی ، الکل نخورید ، به حمام نروید). انواع پاتوسپرمیا.

3- آزمایش MAR - ناباروری ایمنی را از بین می برد (آماده سازی همان آزمایش آنالیز اسپرم است).

4. سونوگرافی + داپلرومتری اندامهای کیسه بیضه - بررسی بیضه ها ، ضمائم و خونرسانی به این اندام ها. آسیب شناسی جراحی ، التهابی و فیزیولوژیکی را از بین می برد.

5. TRUS پروستات و وزیکولهای منی - مطالعه دقیق تر پروستات ، که به شما امکان می دهد ساختار آن را بررسی کنید و فرآیندهای التهابی حاد و مزمن را حذف کنید.

الگوریتم کامل برای بررسی یک مرد نابارور: (بعد از حداقل الگوریتم به منظور روشن شدن تشخیص یا وجود شکایت از بیمار انجام می شود).

1. وضعیت هورمونی - آزمایش خون برای هورمونهای اصلی مسئول دوره طبیعی اسپرماتوژنز و میل جنسی مردان

2. تحقیقات ژنتیکی - براساس تجویز آندرولوژیست براساس وضعیت بالینی انجام می شود (نشانه مستقیم تحقیقات پاتوسپرمیا تلفظ می شود).

3. PCR - تشخیص عفونتهای STD - عفونتهای اصلی منتقله از طریق مقاربت جنسی و تأثیر احتمالی آنها در کاهش کیفیت اسپرم و عدم وجود مفهوم بارداری ، سقط جنین یا محو شدن بارداری را حذف کنید (اسمیر از مجرای ادرار ، 2 ساعت قبل از مطالعه ادرار نکنید).

4. کشت اسپرم - مطالعه انزال در موارد افزایش لکوسیت ها یا ظهور باکتری در منی انجام می شود (تجزیه و تحلیل با استمنا در یک ظرف استریل انجام می شود ، پرهیز لازم نیست).

5. آب پروستات - (راز پروستات) - التهاب غده پروستات را از بین ببرید - پروستاتیت (3 روز پرهیز جنسی قبل از تجزیه و تحلیل لازم است).

6. تعیین سطح رادیکال های آزاد (ROS) - یکی از عواملی که می تواند باروری مردان را کاهش دهد ROS - تولید بیش از حد گونه های اکسیژن واکنش پذیر (ازن ، رادیکال های آزاد ، پراکسید هیدروژن). مقدار کمی ROS برای تنظیم طبیعی عملکرد اسپرم (بیش فعالی و پاسخ آکروزومی) مورد نیاز است. اما تولید بیش از حد ROS منجر به آسیب به غشای اسپرم ، کاهش تحرک و اختلال در توانایی باروری می شود. علاوه بر این ، ROS مستقیماً به DNA کروموزوم آسیب می زند و آپوپتوز اسپرم را آغاز می کند.

7. واکنش آکروزومی - (این تغییرات شیمیایی در ناحیه سر نطفه است که به آن اجازه ورود به تخمک را می دهد) - وقتی اسپرم با ناحیه شفاف غشای تخم تماس پیدا می کند ، آکروزوم اسپرم تحت واکنش آکروزومی قرار می گیرد ، که به طور معمول فقط در سلول های اسپرم از نظر مورفولوژیکی رخ می دهد و به آنها اجازه نفوذ به داخل تخم ها را می دهد. ...

8. بررسی میکروسکوپی الکترونی اسپرماتوزوئید (جدید) - روشی جدید برای مطالعه دقیق تر و تشخیص ساختارهای داخلی آسیب شناختی در اسپرماتوزوئیدها و محتوای پلاسمای منی.

9. بیوشیمی انزال - مطالعه ترکیب پلاسمای منی ، کار اندامهایی مانند غده پروستات ، وزیکولهای منی و اپیدیدیم را منعکس می کند. (بررسی سطح فروکتوز ، اسید سیتریک، آلفا - گلیکوزیداز خنثی ، اسید فسفاتاز پروستات ، روی).

10. مطالعه مورفولوژی براساس کروگر - مطالعه عمیق تر مورفولوژی اسپرم در هنگام انجام اسپرموگرام معمولی (انجام شده در ترکیب با اسپرموگرام). اسپرموگرام چرخانده شده - شامل اسپرموگرام استاندارد (شاخص های توصیه شده توسط WHO) + آزمایش MAR (IgG ؛ IgA) + مورفولوژی کروگر است.

11. آزمون Kurzrock-Miller؛ آزمایش شوارسکی - شناسایی یک درگیری ایمونولوژیک بین زن و مرد در سطح دهانه رحم (فاکتور گردن رحم ، آزمایش postcoital).

12. HLA - تایپ یک زوج متاهل (اگر حاملگی ندارند). برای تعیین آنتی ژن های سازگاری بافتی در همسران انجام می شود. خون وریدی گرفته می شود و سلولهای لکوسیتی از آن جدا می شوند ، روی سطح آنتی ژن های سازگاری بافت قرار دارد.

13. بیوپسی بیضه تشخیصی - طبق تجویز آندرولوژیست ، در موارد آزواسپرمی (برای تشخیص دقیق و انتخاب روشهای درمانی بعدی) انجام می شود.

14. PSA - آنتی ژن اختصاصی پروستات ، این مطالعه برای همه مردان بالای 45 سال انجام می شود.

15. روشهای تشخیصی آزمایشگاهی - با توجه به موارد تجویز شده توسط پزشک: تجزیه و تحلیل ادرار عمومی ، کشت ادرار ، آزمایش خون عمومی ، بیوشیمی خون و غیره

16. تعیین مارکرهای تومور - انتصاب توسط پزشک با توجه به علائم انجام می شود.

چکیده پایان نامهدر پزشکی با موضوع باروری مردان و تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر در منی

r 8 s: -: / من

به عنوان یک نسخه خطی

GROMENKO DMITRY SERGEEVICH

باروری و تولید اکسیژن واکنش پذیر در مایع بذر

14.00.16. - فیزیولوژی آسیب شناسی

پایان نامه برای درجه کاندیدای علوم پزشکی

چلیابینسک - 2002

این کار در آزمایشگاه تحقیقات مرکزی دانشگاه دولتی پزشکی باشکیر و مرکز تنظیم و تولید مثل خانواده با مشاوره ژنتیکی پزشکی بیمارستان بالینی جمهوری خواه به نام G.G. Kuvatov انجام شد.

مشاور علمی: دکترای علوم پزشکی ،

پروفسور P.P. فرخوددینف

مشاور علمی: دکترای علوم پزشکی ،

پروفسور M. A. NARTAYLAKOV

مخالفان رسمی: دکتر علوم پزشکی ،

پروفسور S. B. ARTIFEKSOV

دکتر علوم پزشکی ، پروفسور Yu.N. KOVALEV

نهاد سرب:

آکادمی پزشکی سنت پترزبورگ تحصیلات تکمیلی

دفاع از پایان نامه "__" 2002 در__ ساعت در برگزار می شود

جلسه شورای پایان نامه D-208.117-02 در آکادمی پزشکی دولتی چلیابینسک به آدرس: 454092 ، چلیابینسک ، خیابان ووروسکوگو ، 64.

این رساله را می توان در کتابخانه آکادمی پزشکی دولتی چلیابینسک یافت.

دبیر علمی شورای رساله ، دکترای علوم پزشکی ، استاد

2002 L. V. Krivokhizhina

توصیف عمومی کار

ارتباط مسئله. اخیراً توجه زیادی به مشکلات تولید مثل ، احتمال پیش بینی باروری در انسان شده است. به گفته نویسندگان مختلف (Tiktinsky O، L.، 1999.، V.I.Kulakov، B.V. Leonov، 2000) ، فراوانی ازدواج های نابارور 15٪ - 19٪ است که در شاخص های جمعیتی منعکس می شود. در حدود نیمی از موارد ، ناباروری به دلیل فاکتور مرد است و تمایل بیشتری برای افزایش آن وجود دارد (Felberbraun R.، Diedrich EC.، 1998).

در پایان قرن XX و آغاز قرن XXI در سراسر جهان در کیفیت بهداشت باروری مردان کاهش یافته است (Ter-Avanesov G.V. ، Nazarenko T.A.، Kulakov V.Y.، 2000) ، کاهش شاخص های اسپرماتوژنز با سرعت 2٪ در سال اتفاق می افتد کاهش همزمان نسبت حرکات و اشکال مورفولوژیکی کامل اسپرم (Auger J. et al.، 1995، Irvine S. et al.، 1996.، Sharpe RM et al.، 1995). اسپرماتوژنز فرآیندی از تقسیم مداوم سلول ها است که در برابر اثرات بیماری زای عوامل شیمیایی ، فیزیکی و خانگی آسیب پذیر هستند. به احتمال زیاد ، پدیده کاهش عملکرد اسپرماتوژنیک ، انعکاس تأثیر فزاینده عوامل آسیب رسان بر روی بدن انسان است که در محیط ، محل کار و مصرف انسان مشاهده می شود (Bykov V.L.، 2000). روشن سازی مکانیزمی که منجر به ناباروری در هر مورد خاص می شود برای انتخاب روشهای درمانی بهینه مهم است.

مطالعه پارامترهای انزال ، که شامل معیارهای ماکروسکوپی ، میکروسکوپی ، بیوشیمیایی و عملکردی است ، به طور کلی برای ارزیابی باروری مردان پذیرفته شده است. ارزیابی شاخص های اسپرموگرام تا حد زیادی ذهنی است و به ویژگی های نمونه آزمایش بستگی دارد: هر چه غلظت اسپرم در انزال بیشتر باشد و نسبت فرم های متحرک به تدریج کمتر باشد ، نتایج تکنسین های مختلف آزمایشگاه از ثبات کمتری برخوردار است. در برخی موارد ، کم بودن دفعات لقاح در فرهنگ نتیجه ناهنجاری عملکرد اسپرماتوزوئید است ، که در تجزیه و تحلیل پارامترهای اسپرموگرام سنتی تشخیص داده نمی شود (لئونتیوا O.A. ، Vorobieva O.V. ، Kozlov V. ، V. ، 2000). از طرف دیگر ، روشهای استاندارد تشخیصی همیشه قضاوت در مورد علل تغییر عملکرد اسپرم را ندارند (رهنمودهای WHO ، 1999). بنابراین ، نتایج مطالعات معمول انزال از نظر بالینی به اندازه کافی قابل اعتماد نیست ، زیرا در برخی موارد باروری با انحراف قابل توجه در اسپرموگرام از حد طبیعی مختل نمی شود ، در حالی که ناباروری را می توان در مردان مبتلا به نرموزواسپرمی مشاهده کرد (Liu D.، Baker HWG، 1992 )

اخیراً ، نشریاتی نشان داده شده است که تأثیر اکسیداسیون رادیکال های آزاد (FRO) بر فرآیندهای تولید مثل را نشان می دهد (Conte G.، Milandi D.، De Marinis L.، 1999). به طور خاص ، توانایی اسپرم در تولید رادیکال های آزاد (CP) ، که دریافت می شود

نام عمومی گونه های اکسیژن فعال (ROS) است: آنیون رادیکال سوپراکسید ، آنیون رادیکال هیدروکسیل ، فرم اکسیژن منفرد ، پراکسید هیدروژن و هیپوکلریت. مسئله عملکرد گونه های اکسیژن واکنش پذیر بر روی اسپرم در حال حاضر به خوبی درک نشده است. فقط مشخص است که بیش از حد اکسیژن واکنش پذیر می تواند بر سلولهای زایا تأثیر منفی بگذارد (Akkeya VL. ، 1999).

اخیراً استفاده از روشهای شیمی لومینسانس با استفاده از القا کننده های خاص لومینسانس برای شناسایی ROS آغاز شده است. آنالوگهای لومینول ، لوسیژنین و لوسیفرین به عنوان سلفهایی استفاده می شوند که مستقیماً بر روند کار تأثیر نمی گذارند ، اما فقط شدت شیمی لومینسانس ثبت شده (لومینوفورها) را افزایش می دهند. نوع دیگری از سلف ها روند اکسیداسیون رادیکال های آزاد را تسریع می کند ، به ویژه ، آنها شامل یون های فلزات با ظرفیت متغیر هستند ، به عنوان مثال نمک های آهنی ، پراکسید هیدروژن ، پرمنگنات پتاسیم ، مواد قلیایی.

در این راستا ، علاقه تئوری و عملی مطالعاتی است که به شناسایی مکانیسم های اختلالات تولید مثل در مردان ، توسعه روش های سریع برای ارزیابی تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر در اسپرم و تعیین وضعیت اکسیداسیون رادیکال های آزاد در انزال اختصاص دارد.

هدف مطالعه

برای ارزیابی وضعیت اکسیداسیون رادیکال های آزاد در مایع منی در ناباروری مردان.

وظایف تحقیق

1. بررسی وضعیت تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر در انزال در سلامت و بیماری.

2. سطح فعالیت آنتی اکسیدانی کل پلاسمای اسپرم را تعیین کنید.

3. بر اساس ثبت شیمی لومینسانس ، شرایط بهینه برای تعیین وضعیت اکسیداسیون رادیکال های آزاد و فعالیت آنتی اکسیدانی در اسپرم را انتخاب کنید.

4- اثبات بالینی اثربخشی استفاده از روشهای تحقیق شیمی شیمی به عنوان یک معیار اضافی برای ارزیابی باروری مردان.

نوآوری علمی

به عنوان یک نتیجه از مطالعات ، یک روش سریع برای ارزیابی وضعیت اکسیداسیون رادیکال های آزاد در انزال ایجاد شد که شامل تعیین شاخص های انتگرال کل فعالیت آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم در یک سیستم مدل است که گونه های اکسیژن واکنش پذیر و لومینسانس خود به خود وابسته به لومینول انزال را تولید می کند.

مکانیسم های منجر به برخی از اشکال ناباروری مردان روشن شده است. با ناباروری مردان ، افزایش نسل ایجاد می شود

گونه های اکسیژن فعال توسط اسپرم های معیوب دارای عملکرد با فعالیت آنتی اکسیدانی بالای پلاسمای اسپرم - سایپرز ، باشگاه دانش

نقش پاتوژنتیک اختلالات در تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر در ناباروری مردان مشخص شده است. نشان داده شده است که در اشکال ایدیوپاتیک ناباروری مردان افزایش تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر وجود دارد.

اهمیت عملی

یک روش بیان غیر تهاجمی برای ثبت شیمی لومینسانس انزال برای مطالعه وضعیت تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر و فعالیت آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم در ناباروری مردان پیشنهاد شده است ، آزمایش شده و در عمل متخصصان اورولوژی انجام می شود.

با کمک روش توسعه یافته ، هنگام بررسی مردان با باروری اثبات شده ، شاخص های هنجاری شیمی لومینسانس ایجاد شد. به طور معمول ، انزال با سطح پایین لومینسانس و فعالیت آنتی اکسیدانی بالای پلاسمای اسپرم مشخص می شود.

رویکردهای جدید برای درمان بیماری زایی ناباروری مردان با در نظر گرفتن نقش اکسیداسیون رادیکال های آزاد ، که شامل انجام آنتی اکسیدان درمانی منطقی و اصلاح تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر است ، مشخص شده است.

تصویب کار و اجرای نتایج آن در عمل

مواد پایان نامه در موارد زیر گزارش شده است:

1. سمینار علمی و عملی انجمن روسی تولید مثل انسان "درمان ناباروری: مشکلات حل نشده" ، ساراتوف ، 2001 ؛

2. جلسه انجمن ارولوژی جمهوری باشکورتستان ، 2000. و

3. جلسه بخشی "بهداشت باروری جمعیت مردان جمهوری بلاروس" کنگره زنان و زایمان و متخصصان اطفال جمهوری باشکورتستان ، اوفا ، 2001 ؛

4. کنفرانس علمی جوانان جمهوری خواه "س ofالات پزشکی نظری و عملی" ، اوفا ، 2001 ؛

5. کنگره بین المللی I "فناوری های نوین پزشکی" ، سن پترزبورگ ، 2001؛

6. کنفرانس علمی-عملی ملی با مشارکت بین المللی "رادیکال های آزاد ، آنتی اکسیدان ها و بیماری های انسانی" ، اسمولنسک ، 2001.

7. سمینار متخصصان زنان و زایمان «دیدگاه مدرن در مورد عفونت های واژن. کلامیدیا کاندیدیازیس مسائل ناباروری مردان »، اوفا ، 2002.

روش توسعه یافته برای ثبت گونه های اکسیژن واکنش پذیر در انزال برای تشخیص و تعیین تاکتیک های درمانی استفاده می شود

ناباروری مردان در مرکز جمهوری خواه برای تنظیم و تولید مثل خانواده با مشاوره پزشکی ژنتیک در اوفا. مطالب به دست آمده در پایان نامه به برنامه درسی وارد شده و در دوره سخنرانی های دانشجویان دانشگاه پزشکی دولتی باسکیر و همچنین کادرفنی های انستیتوی آموزش تحصیلات تکمیلی دانشگاه پزشکی دولتی باشکیر گنجانده شده است.

مقررات اصلی برای حفاظت:

1. روشی برای ارزیابی تولید گونه های اکسیژن واکنشی در انزال و تعیین فعالیت آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم ، براساس ثبت شیمی لومینسانس ایجاد شده است.

2. افزایش در تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر در اسپرم در برخی از اشکال ناباروری مردان ،

3. در مطالعه اکسیداسیون رادیکال های آزاد در انزال ، انواع "پاتوسپرمیا" در ناباروری ایدیوپاتیک شناسایی شد که با روش های استاندارد تحقیقات انزال نمی توان تعیین کرد.

4- شناسایی مکانیسم های بیماری زایی مرتبط با تولید مختل گونه های اکسیژن واکنش پذیر در اسپرم و منجر به ناباروری مردان ، اجازه می دهد تا تاکتیک های درمانی مناسب را با هدف نرمال سازی اکسیداسیون رادیکال های آزاد در انزال ثابت کنید.

دامنه و ساختار پراکندگی کار در 116 صفحه متن تحریریه ارائه شده است و شامل بخشهای بله است: "مقدمه" ، "بررسی ادبیات" ، "مواد و روشهای تحقیق" ، "نتایج تحقیقات خود" ، "بحث در مورد نتایج" ، "نتیجه گیری" ، "عملی" توصیه ها "،" فهرست ادبیات ". پایان نامه با 19 جدول ، 13 شکل نشان داده شده است. فهرست کتابشناسی 205 منبع ادبیات را شامل می شود که 88 منبع داخلی و 117 منبع خارجی است.

مواد و روشهای تحقیق

در این کار ، مطابق با هدف و اهداف تعیین شده ، مراحل اصلی زیر مطالعه مشخص شد (جدول 1). ما در ابتدا 160 مرد را كه با مشاوره پزشكی و ژنتیك در بیمارستان بالینی جمهوری خواه به نام مركز جمهوری خواه برای تنظیم و تولید مثل خانواده مراجعه كرده اند ، بررسی كردیم. G.G. Kuvatova. از این تعداد ، 10 نفر مردانی هستند که باروری آنها ثابت شده است (اهداکنندگان اسپرم). 150 مرد باقیمانده در ازدواج خود خواستار ناباروری شدند. بیماران مبتلا به آزواسپرمی ، ناهنجاری های ژنتیکی ، فرآیندهای التهابی حاد با علل خاص و غیر اختصاصی (اورکی اپیدیدیمیت ، پروستاتیت ، وزیکولیت ، اورتریت) ، با ایمونولوژیک اثبات شده

عوامل ناباروری و همچنین مردان بالای 40 سال. گروه مشاهده نیز شامل مردانی نبوده است كه باروری همسر آنها مشكوك باشد (ناباروری لوله ، اختلالات) چرخه قاعدگی، آندومتریوز ، بیماری تخمدان لولیستیک و غیره).

در نتیجه انتخاب هدفمند ، گروهی از مردان فعال جنسی سالم (41 بیمار) شناسایی شدند ، که هدف یک معاینه عمیق بالینی و آزمایشگاهی بود. در کار حاضر گروه اصلی شامل 31 بیمار با فاکتور ناباروری مردانه ، گروه کنترل شامل 10 بیمار با باروری اثبات شده (اهدا کنندگان اسپرم) بود.

میز 1

مشخصات عمومی مطالعه

نه مراحل و وظایف تحقیق هدف و دامنه تحقیق نوع تحقیق

1 تعیین شاخص های هنجار شیمی لومینسانس مایع منی و اجزای تشکیل دهنده آن از 10 اهداکننده سالم بررسی وابستگی به یومینول (LZHL) و Fe2 "ناشی از CL منی و اجزای آن.

2 معاینه بالینی و آزمایشگاهی مردان نابارور ، مطالعه CL اسپرم و اجزای تشکیل دهنده آن. 31 بیمار در یک ازدواج عقیم ؛ 10 اهدا کننده سالم معاینه عینی ؛ تجزیه و تحلیل آزمایشگاهی استاندارد بالینی ، منی. ثبت مایع منی وابسته به لومینول (LZHL) ، Ge2 + CL ، سلولها و پلاسمای اسپرم.

3 تجزیه و تحلیل نتایج مقایسه ، انتخاب آموزنده ترین شاخص ها برای ارزیابی باروری 31 بیمار در ازدواج نابارور. 10 اهدا کننده سالم پردازش آماری داده ها با استفاده از آزمون 1 دانشجویی ، مقایسه مقادیر CL اسپرم با داده های سنتی بالینی و آزمایشگاهی.

پارامترهای نرمال CL مایع منی و اجزای آن با بررسی مردان در گروه کنترل تعیین شد. بعلاوه ، یک معاینه بالینی و آزمایشگاهی ، مطالعه اسپرم CL و اجزای آن در مردان گروه اصلی انجام شد. پس از پردازش آماری نتایج به دست آمده ، تجزیه و تحلیل داده های به دست آمده انجام شد

انتخاب آموزنده ترین شاخص های توصیف کننده وضعیت عملکرد اسپرم.

همه "بیماران تحت معاینه کلینیکی و آزمایشگاهی با استفاده از غربالگری عفونی (با واکنش زنجیره ای پلیمراز) ، روشهای تشخیصی هورمونی (تعیین هورمون محرک فولیکول ، تستوسترون ، پرولاکتین) ، معاینه سونوگرافی پروستات و وزیکولهای منی ، سونوگرافی داپلر عروق بیضه قرار گرفتند. اهداكنندگان اسپرم و بيماران مبتلا به اوليگوزواسپرمي براي حذف بيماري شناسي ژنتيكي تحت كاريوتيپ قرار گرفتند. اجزاء. سلولهای منی با سانتریفوژ گرادیان چگالی ایزوپایکنتیک جدا شدند ،

ثبت شیمی لومینول وابسته به لومینول (LZHL) و CL-ناشی از Fe2 * در دستگاه "Chemilumimer - 003" با پشتیبانی رایانه ، تولید شده در آزمایشگاه بین دانشگاهی سیستم های فنی تحقیقات پزشکی ، در دستگاه "Chemilumimer - 003" انجام شد. شدت LZHL توسط تعدادی از پارامترها قضاوت شد ، اول از همه ، توسط مجموع نور (SS) و حداکثر دامنه لومینسانس (MSL) ، که مطابق با سرعت تشکیل ROS است. قبل از اندازه گیری لومینسانس ، حجم معینی از اسپرم مورد مطالعه با 2 میلی لیتر سالین حاوی لوآسمول (5-آمینو-2،3-دی هیدرو-1،4-فتالازیندنون) با غلظت نهایی 105 M مخلوط شده و در محفظه ای جدا شده از نور دستگاه قرار گرفت. این مخلوط کاملا مخلوط شده و CL در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه ثبت شد.

برای ارزیابی فعالیت آنتی اکسیدانی ، 0.1 میلی لیتر از پلاسمای اسپرم به سیستم مدل (MS) اضافه شد. به عنوان یک سیستم مدل ، ما از 20 میلی لیتر بافر فسفات (KH2PO4-20 rtiM ، KC1 - 105 pM ، pH با تیتراسیون با محلول KOH اشباع شده) با سیترات (50 گرم در دقیقه) و لومینول (10 میلی متر) به 7.45 تنظیم کردیم. در عرض 10 ثانیه جریان جریان ثبت شد ، پس از آن آغاز کننده تشکیل ROS - 1 میلی لیتر محلول 50 میلی مولار سولفات آهن (FeS0471120) اضافه شد. غلظت نهایی FeSO4 در محیط جوجه کشی 2.5 میلی متر بود ، درخشش به مدت 5 دقیقه با هم زدن ثابت ثبت شد. CL با مقدار لومینسانس خود به خود (SPL) ، مدت دوره نهفته از لحظه تجویز یونهای آهن تا ابتدای توسعه یک فلش آهسته تعیین شد و دامنه های چشمک زن سریع و آهسته نیز برآورد شد.

به منظور تعیین منبع ROS در انزال ، سلولهای اسپرم در یک شیب چگالی توسط سانتریفوژ گرادیان چگالی ایزوپایکنتیک از هم جدا شدند. Ficoll / Hypaque به عنوان شیب استفاده شد: 20 میلی لیتر 9٪ Ficoll ■ + ■ 10.0 میلی لیتر 50٪ Hypaque. تراکم 1.12 گرم در میلی لیتر PH

شیب آماده شده به 7.5 رسیده است. محلول Ficoll فشار اسمزی کمی دارد تا از آسیب رسیدن به سلولهای تقسیم شده جلوگیری شود. برای جداسازی سلولها ، 1 میلی لیتر از انزال روی 1 میلی لیتر از شیب آماده شده لایه لایه شده و در 500 گرم به مدت 20 دقیقه سانتریفیوژ شد. مایع رویی برداشته شد و 0.2 میلی لیتر سانتریفیوژ باقی مانده که تکان داده شد و غلظت اسپرماتوزوآ اندازه گیری شد. همچنین ، لامهای به دست آمده برای تعیین لکوسیتهای چند مورفون هسته ای رنگ آمیزی شدند. برای مطالعه ، غلظت اسپرم به مقدار اولیه ، یعنی به سطح غلظت در انزال بومی ، با رقیق کردن یک مقدار شناخته شده رسوب با نمک ، آورده شد. پس از آن ، LZHL ثبت شد. هنگام استفاده از این روش ، نوتروفیل ها با فرکانس 95-94٪ ته نشین شدند.

پردازش آماری داده های به دست آمده برای گروه های مردان با روش های پذیرفته شده توسط آمار استاندارد با استفاده از PC Pentium II-200 انجام شد. در هر گروه بالینی ، برای ارزیابی شاخص های خاص ، سری تغییرات با پردازش بعدی آنها تدوین شده است: محاسبه شاخص های ساختار (در) ، تعیین میانگین حساب (M) ، انحراف معیار (b) و خطای نمایندگی مقدار متوسط \u200b\u200bیا نسبی (t). ارزیابی پایایی نتایج با استفاده از آزمون Student (t) انجام شد.

نتایج مطالعات و بحث و بررسی آنها

میانگین سنی مردان دارای باروری اثبات شده (گروه شاهد) 8/0 ± 7/28 سال بود ، مردان از نظر ناباروری معاینه شدند (گروه اصلی) - 7/0 ± 3/29 سال.

مردان گروه اصلی از یک سال تا 13 سال در یک ازدواج عقیم بودند (45.2 درصد از کسانی که بیش از 2.5 سال معاینه شده اند). در طول تاریخ آنها اغلب به پروستاتیت مزمن ، بیماری های مقاربتی ، رگهای واریسی طناب اسپرماتیک مبتلا بودند. 10 (32.3٪) مرد خطرات شغلی داشتند.

مردان گروه شاهد سابقه بیماری های فوق را نداشتند ، متاهل بودند ، فرزندان سالمی داشتند (1-3 فرزند). از اسپرم این مردان برای لقاح دهنده استفاده شد.

شاخص های اسپرموگرام مردان در گروه کنترل با الزامات هنجاری مطابقت دارد.

با توجه به نتایج تجزیه و تحلیل اسپرموگرام در مردان مبتلا به ناباروری ، زیر گروه های زیر را در گروه اصلی شناسایی کردیم:

نورموزواسپرمی - (شاخص ها با مقادیر هنجاری مطابقت دارند) - 17 نفر (54.8٪) ؛

الیگوزواسپرمیا - (کاهش غلظت اسپرم زیر 20 میلیون در میلی لیتر) - در انسان (25.8)) ؛

آدنوزواسپرمی - (کاهش تحرک اسپرم) دسته های A-B کمتر از 50٪) - 6 نفر (19.4٪)

تراتوزواسپرمیا - (افزایش نسبت فرمهای آسیب شناختی)

اسپرماتوزوئید بیش از 40٪) - در 5 (16.1٪) نفر تعیین شد. تراتوزواسپرمی جدا شده تشخیص داده نشد ، اما در دو مورد با الیگوزواسپرمیا (5/6 درصد) و در سه مورد با آدنوزواسپرمیا (7/9 درصد) همراه بود.

این داده ها به صورت گرافیکی در شکل 1 و 2 ارائه شده است.

شکل: 1 ساختار نتایج اسپرموگرام بیماران اصلی

B نرموزواسپرمی

III آدنوزواسپرمی

تراتوزواسپرمی 16.1٪

□ آدنوزواسپرمی

□ oligozoospermia

شکل: 2 ساختار پاتوسپرمیا در گروه اصلی

ویژگی های مقایسه ای انزال گروه های اصلی و کنترل در جدول 2 ارائه شده است. تفاوت معنی داری در محتوای سلول های اسپرماتوژنز در گروه های بررسی شده نشان داد: 4.7 ± 0.7 میلیون در میلی لیتر در

گروه اصلی و 2 ± 0.6 میلیون در میلی لیتر در گروه کنترل. همچنین کاهش قابل توجهی در تعداد اسپرمهای گروه "A" و افزایش تعداد اسپرمهای گروه "O" در مقایسه با شاهد وجود دارد. در هر دو گروه ، تعداد لکوسیت ها از 1x106 در میلی لیتر تجاوز نکرد. اختلاف معنی داری در محتوای لکوسیت ها در گروه های مورد بررسی وجود نداشت.

جدول 2

شاخص های اسپرموگرام در گروه های اصلی و کنترل

شاخصهای اسپرموگرام گروه اصلی (n-31) گروه کنترل (n-1R)

غلظت اسپرم ، mln / ml 54.9 ± 8.1 81.2 + 11.2

تحرک اسپرم ،٪: دسته "A" 43.4 ± 2.8 *** 57.6 2.0

از نظر ریخت شناسی کامل ، فرم های 67.1 + 1.7 71.2 + 1.3٪

حجم ، میلی لیتر 3.3 ± 0.2 3.1 0.2

سلولهای اسپرماتوژنز ، mln / ml 4.7 / 0.7 ** 2 + 0.6

توجه: ** -ص<0,03; ***- р<0,001.

برای توسعه تاکتیک های بهینه مطالعه شیمی لومینسانس مایع منی ، لازم بود که بدانید چگونه تغییرات در حجم و مدت زمان ذخیره سازی ماده آزمایش بر پارامترهای لومینسانس تأثیر می گذارد. جنبه مهم مطالعه تعیین منبع اصلی ROS در انزال است. برای این منظور ، در مرحله اول ، انزال به سلولهای اسپرموپلاسم و سلول جدا شد ، سپس ، برای جداسازی لکوسیت های پلی مورفونوکلئر ، سانتریفوژ ایزوپایکنوتیک در یک شیب چگالی انجام شد. به طور جداگانه ، فعالیت آنتی اکسیدانی کل (AO A) پلاسمای اسپرم ارزیابی شد ، درجه آن با توانایی سرکوب لومینسانس سیستم مدل ارزیابی شد.

تأثیر تغییرات در حجم و مدت زمان ذخیره انزال در سطح LZHL.

به منظور توسعه شاخص های هنجاری مایع منی LZHL ، بیماران گروه کنترل مورد بررسی قرار گرفتند. برای ثبت LZHL ، مواد تحت مطالعه در جلدهای زیر گرفته شد: 0.05؛ 0.1 و 0.3 میلی لیتر. با افزایش حجم مواد بررسی شده ، پارامترهای اصلی CL افزایش می یابد. با توجه به عدم امکان به دست آوردن مقدار زیادی از مواد و نیاز به استفاده از آن برای تجزیه و تحلیل دیگر ، تصمیم گرفته شد

حجم نمونه آزمایش را برابر با 0.1 میلی لیتر محدود کنید. به منظور حذف تغییرات LZHL در حین ذخیره سازی ، CL در گروه کنترل ارزیابی شد. LZHL پس از 15 ثبت شد. سی 45؛ 60 دقیقه ویژگی CL منی در عرض 60 دقیقه تغییر نمی کند. بنابراین ، ظرف یک ساعت از لحظه جمع آوری انزال ، با توجه به قوانین جمع آوری ، حمل و نقل ، ذخیره سازی ، اندازه گیری CL انزال امکان پذیر است.

تعیین منبع ROS در انزال.

منابع بالقوه ROS در انزال اسپرم و سلولهای گرد هستند. به عنوان ماده ای برای مطالعه ، ما از 0.1 میلی لیتر سوسپانسیون سلولی و 0.1 میلی لیتر از پلاسمای اسپرم حاصل از سانتریفیوژ 1 میلی لیتر انزال در 500 گرم به مدت 20 دقیقه استفاده کردیم. هر نمونه در محلول فیزیولوژیکی لومینول با غلظت نهایی 10-5 M قرار داده شد که طبق پروتکل تهیه شده ثبت شده است. داده های بدست آمده در جدول 3 ارائه شده است. بر اساس داده های بدست آمده ، می توان نتیجه گرفت که منبع ROS در انزال سلولها هستند. سطح مقدار نور و حداکثر درخشندگی به طور قابل توجهی با شاخص های مربوطه به دست آمده در مطالعه پلاسمای اسپرم متفاوت است.

جدول 3

سطح سلولهای LZHL و پلاسمای اسپرم در گروه کنترل ...........\u003e \u003d 10) ........

شاخص های LZHL دامنه مقادیر مقدار متوسط \u200b\u200bМ ± т سطح قابلیت اطمینان تفاوت ها

سلول های پلاسما سلول های پلاسما

جمع سبک ، نسبت 4.2918.75 0.351.73 8.6 ± 2.8 0.9 03 ر< 0,05

درخشندگی خود به خودی ، rel. 0.172.11 0.062.62 1.0 * 0.5 0.5 ± 0.5 -

حداکثر درخشندگی ، نسبت 1.125.41 0.160.57 2.4 ± 0.8 0.4 ± 0.1 ص< 0,05

برای تعیین سطح تولید ROS توسط سلولهای مختلف مایع منی ، 1 میلی لیتر از انزال در یک شیب چگالی تحت سانتریفوژ ایزوپایکنوتیک قرار گرفت. هنگام استفاده از این روش ، نوتروفیل ها با فرکانس 95-94٪ ته نشین شدند. نتایج مطالعه انزال در گروه کنترل در جدول 4 ارائه شده است.

جدول 4

سطح LZHL اسپرم بومی و اسپرم شسته شده در گروه کنترل (10 n n)

شاخص های LHL اسپرم های بومی اسپرم های شسته شده سطح اهمیت تفاوت ها

جمع سبک ، نسبت 2.9 ± 0.8 2.8 0.4

درخشندگی خود به خودی ، rel. 0.9 ± 0.27 1L 0.07 -

حداکثر درخشندگی ، نسبت 0.7 + 0.17 0.6 ± 0.1 -

بنابراین ، می توان نتیجه گرفت که مخلوط لکوسیت ها در انزال اهداکنندگان سالم به طور قابل توجهی بر سطح کل CL منی تأثیر نمی گذارد.

برای تعیین نقش لکوسیت ها در تولید ROS ، معاینه 5 بیمار مبتلا به لکوسپرمیا انجام شد که در گروه مطالعه یا گروه کنترل قرار نگرفتند. سطح لکوسیت ها در این مردان از 1x106 فراتر رفته و به طور متوسط \u200b\u200b0 2.5 5/2 ، 5/5 اینچ بوده است. معاینه با روش فوق انجام شده است. نتایج در جدول 5 ارائه شده است.

جدول 5

سطح LPCL اسپرم های بومی و اسپرم های شسته شده در ___ بیماران مبتلا به لکوسپرمیا _________

شاخص ها LZHL Leukospermia اسپرم های بومی در شمارنده ، گروه

اسپرم بومی اسپرم شسته شده

جمع سبک ، نسبت 30.2 ± 6.5 * 4.4 ± 1.2 2.9 ± 0.8

درخشندگی خود به خودی ، rel. 7.1 ± 1\u003e 3 * 1.23 ± 0.7 0.9 0.3

حداکثر درخشندگی ، نسبت 9.3 ± 2.1 * 2.6 0.8 ** 0.7 0.2

توجه: * - ص<0,05 в сравнении с отмытыми сперматозоидами;

** - R<0,05 в сравнении с контрольной группой. Получены

تفاوت معنی داری در تمام شاخص های LWHL پس از جداسازی اسپرماتوزوئیدهای شسته شده در بیماران مبتلا به لکوسپرمیا. با مقایسه سطح شاخصهای LWHL اسپرمهای بومی در گروه کنترل و سطح شاخصهای LWHL اسپرمهای شسته شده در بیماران مبتلا به لوکوسپرمیا ، از نظر سطح MCS اختلاف معنی داری بدست آمد. سطح CC و CPS تفاوت معنی داری نداشت. از آنجا که منبع ROS در انزال اسپرماتوزوئیدها و لکوسیت ها است ، در موارد لکوسپرمیا در بیماران ، LPCL اسپرم را می توان پس از جداسازی سلول با سانتریفوژ گرادیان چگالی ایزوپنوتیک انجام داد.

تعیین فعالیت آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم.

مقدار انتگرال پتانسیل آنتی اکسیدانی بذر

پلاسما توانایی پلاسمای اسپرم در سرکوب لومینسانس سیستم مدل است که در آن واکنش های FRO اتفاق می افتد.

خواص آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم در درصد مهار لومینسانس MS ارزیابی شد ، وقتی به آخرین 0.1 میلی لیتر از پلاسمای اسپرم اضافه شود. محاسبه مطابق فرمول انجام شد:

SAOA \u003d 100٪ - (SMC - SMCCIT) / SMCrl00٪ ، جایی که SAOA کل فعالیت آنتی اکسیدانی است. SMC حاصل جمع سیستم مدل است. SMCCI1 - مجموع کم سیستم مدل + پلاسمای اسپرم. کل AO A پلاسمای اسپرم دهنده به طور متوسط \u200b\u200b41.9٪ است. AOA کل پلاسمای اسپرم در بیماران گروه اصلی به طور متوسط \u200b\u200b41.6٪ است.

شکل 3 الگوریتم روش بیان برای ثبت انزال CL را نشان می دهد.

شکل: 3. الگوریتم تعیین ROS و AOA انزال.

مطالعه روند تولید ROS در اسپرم در شرایط عادی در 10 بیمار از گروه کنترل (اهدا کنندگان اسپرم سالم) انجام شد. در مطالعات بیشتر ، نتایج به دست آمده به عنوان استاندارد مقایسه با شاخص های LHL و Fe2 ناشی از CL در مردان در ازدواج های نابارور استفاده شد. مطالعه روند تولید ROS در اسپرم در آسیب شناسی در 31 بیمار از گروه اصلی (مردان مبتلا به ناباروری) انجام شد.

جدول 6 شاخصهای اصلی LZHL را در گروههای اصلی و کنترل قبل و بعد از جداسازی سلول نشان می دهد. اختلاف معنی داری بین سطح CL از گروه اصلی و کنترل مشاهده شد. افزایش پارامترهای CV در گروه مورد مطالعه احتمالاً با توانایی متفاوت لکوسیت ها در تولید ROS و همچنین پاتوسپرمای تشخیص داده شده در بیماران گروه مطالعه همراه است. برای حذف نقش لکوسیت ها در تولید ROS ، تجزیه و تحلیل مقایسه ای پس از جداسازی سلول در یک شیب چگالی انجام شد. در نتیجه ، شاخص های LPHL در گروه اصلی پس از شستشو به طور قابل توجهی پایین تر از اسپرم های بومی بود ، اما قابلیت اطمینان تفاوت ها با گروه کنترل باقی ماند.

جدول 6

شاخص های اصلی PWHL در گروه های مشاهده شده

شاخص های اصلی LZHL گروه اصلی (n-31) گروه کنترل (n * 10)

منیزیم g منی 1 مجموع لومینسانس Syetum ، واحدهای مربوطه 28.9 ± 8.5 ** 2.9 ± 0.8

لومینسانس خود به خودی ، جمعاً 4.8 ± 1.5 * 0.9A0.3

حداکثر درخشندگی ، واحدهای نسبی 6.7 ± 1.9 ** 0.7 0.2

سلول اسپرم شسته شده لومینسانس Svstosum ، واحدهای نسبی 12.1 ± 1.9 *** 2.8 0.4

لومینسانس خود به خودی ، واحدهای نسبی 2.5 ± 0.5 ** 1.1 ± 0D

حداکثر درخشندگی ، واحد. 4.1 ± 0.8 *** 0.6 0 ،)

توجه: * - ص<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001.

در مرحله بعدی مطالعه ، پارامترهای مورفو عملکردی انزال بیماران گروه اصلی با توانایی تولید ROS توسط اسپرم مقایسه شد. در جدول 7 داده های خلاصه ای برای همه زیر گروه های گروه اصلی قبل و بعد از جداسازی سلول و همچنین داده های نظرسنجی مشابه برای گروه کنترل ارائه شده است.

شاخص های عملکردی مورفو و شاخص های CL از گروه های اصلی و کنترل

جدول 7

تراتوزواسپرمیا (n-5) نورموزواسپرمیا (n \u003d 17) ادیگوزواسپرمیا (n \u003d 8) Astauzospermda (n \u003d 6) گروه اصلی (0 \u003d 31) گروه کنترل<п=10)

سلولهای بومی شسته شده اسپرم شسته شده ، سلولهای iMTHB. اسپرم شسته شده ، بومی klepag. منی سلولهای ما ، اسپرم اوشگ. سلولهای ناتیا منی کلجی بومی نطفه

تعداد سلول mln / ml - 27.6 ± 6.5 - 71.4+ 13.5 - P.Sh.8 - 50.5 + 7.1 * - 54.9 8.1 - 81 ، 2 ، IU

a - 2S ، 4 ± 4.4 ** + - 54.6 + 2.2 - 41.9 4.5 - 21.3 4.6 - 43.4 2.8 *** - 57.612 ، 0

1 ب - 19 + 5.7 - 14.8 ± 1 ، ب 16.1 + 2.8 - 14 + 1.4 - 15 ± 1.1 - I2 ، t ± 2.4

"s - 7D ± 3.1 4.8 ± 1.1 - 7.3 £ 2.9 16.7 14.9 * - 6.9 ± 1.6 3 ، W ، 6

D - 48.4 ± 7.8 * - 25.8 2.1 - 34.7 1.6 - 4816.6 ** - 34.71 1.9 ** - 27.2 + 1.3

ریخت شناسی٪ - 47.4 ± 1.8 - 73.1 0.9 - 62.9 4.2 - 60.2 5.4 - 67.111 ، 7 - 71.211.3

تعداد لکوسیت ها 0 کمتر از Ylv "md 0 کمتر از 1 mln" ml 0 کمتر از 1 mln / ml 0 کمتر از 1 mln ml 0 کمتر از 1 mln / m 0 کمتر از 1 ml "جنوب

a o CC 23.3 ± 3.90 "** 39.3 + 11.3 12.9 ± 2.8 ** 38.3 ± 14.9 * 8.2 ± 3.2 13.4 ± 6 ، 8 15.3+ 53 * 22.9 ± W ، 9 12.1+ 1 d *** 28.9 ± 8.5 ** 2.8 ± 0.4 2.9 + 0.8

2 3 2 ثانیه SPS 3.03 ± 0.6 3.910.7 ** 3.3 ± 0.8 ** 7.1 ± 2.7 * 1.4 + 0.4 1.W.7 1.810.7 2.110.7 2.510.5 4.8 + 1.5 * 1.1 + 0.1 0.910.3

N s MC 8.242.6 * 9.9 + 3.1 ** 4.5 + 1.2 "* 8.7 ± 3.4 * 2.6 + 1.3 3.4 ± 1.9 5.02 2.5 5. 5.612.8 4.110.8 6.7 + 1.9 ** 0.6 ± 0.1 0.7 ± 0.2

S a SS - 29.3 ± 1.8 - ZZ.SH 0 - 30.1 ± 3.2 - 32 ، E ± 2.1 - 31.7 1.1 - E1.9 ± 1.9

t W SPS - 7.4 + 1.3 - 7.5 + 1.9 - 8.9 ±! ، 6 - 8.0 ±) ، 8 - 8.8 ±] - ب ، 9 ± 1.2

Bs I ... a a؟ MS - 13.9 ± 0.9 - 15DU.8 - 14.8 + 0.6 - 15.6 + 0.7 14.8 0.3 - 15 ، W ، 0

جدول نشان می دهد که ، به طور کلی ، پارامترهای عملکردی مورفوکال انزال گروه اصلی به طور قابل توجهی از کنترل فقط در تحرک متفاوت است: در گروه "A" (حرکت سریع اسپرم به جلو)<0,001, и по категории «В» (неподвижные сперматозоиды) - р<0,01. Различия при анализе морфо-функциональных характеристик в подгруппах соответствовали принципу, по которому было проведено разделение на данные подгруппы. Так, в подгруппе с олигозооспермией достоверные различия по сравнению с контрольной группой были выявлены по количеству клеток (р<0,001) и по подвижности (по категориям «А» и «О» - р<0,01), при этом концентрация сперматозоидов была ниже нормативных показателей ВОЗ, а процент подвижных сперматозоидов соответствовал нормам ВОЗ. В подгруппе с астенозооспермией достоверные различия по сравнению с контрольной группой были выявлены по уровню подвижности (категории «А» - р<0,001, категории «С» - р<0,05, категории «О» - р<0,01) и по количеству клеток - р<0,05, хотя в среднем концентрация сперматозоидов в этой подгруппе соответствовала нормам ВОЗ, В подгруппе с нормозооспермией достоверных различий по сравнению с контрольной группой не было.

در زیر گروه با تراتوزواسپرم ، تفاوت معنی داری ، بر خلاف سایر زیر گروه ها ، در پارامترهای مورفولوژیکی (p<0,001), а также по показателям прогрессивно подвижных сперматозоидов (р<0,001), концентрации половых клеток (р<0,01).

هنگام تجزیه و تحلیل شاخص های LZHL اسپرم بومی بیماران در گروه اصلی ، تفاوت معنی داری در سطح SS (p<0,01), СпС (р<0,05), Мс (р<0,01) в сравнении с контрольной группой. Различия сохранились и после разделения клеток в градиенте плотности; СС (р<0,003), СпС (р<0,01), Мс (р<0,001). Однако, не во всех подгруппах основной группы были получены аналогичные результаты, достоверные различия выявлены при нормозооспермии и тератозооспермии. Основные показатели ЛЗХЛ при тератозооспермии достоверно отличались от соответствующих показателей контрольной группы (СС - р<0,01, СпС - р<0,01, Мс - р<0,01). Различия сохранились и после разделения клеток в градиенте плотности: СС (р<0,001), СпС (р<0,01), Мс (р<0,05). Видимо, увеличение показателей ЛЗХЛ обусловлено большей способностью сперматозоидов с измененной морфологией к генерации АФК.

در مطالعه اسپرم های بومی از بیماران مبتلا به الیگوزواسپرمی و آدنوزواسپرمی در مقایسه با گروه کنترل ، تفاوت معنی داری مشاهده نشد. در همان زمان ، پس از تقسیم سلولی ، شاخص های SS در زیر گروه مبتلا به آدنوزواسپرمی تفاوت معنی داری با گروه کنترل داشتند (p<0,05). На увеличение среднего показателя светосуммы повлияло наличие в данной подгруппе пациентов с тератозооспермией. Как уже было указано выше, изолированно тератозооспермия не выявлялась, а сочеталась с олигозооспермией в 6,5% случаев и астенозооспермией в 9,7%случаев.

هنگام مقایسه شاخص های LZHL در بیماران گروه اصلی با نرموزواسپرمی و بیماران در گروه کنترل ، تفاوت معنی داری در سطح CV بدست آمد (p<0,05), СпС (р<0,05), Мс (р<0,05). Различия увеличились после разделения клеток в градиенте плотности: СС (р<0,01), СпС (р<0,01), Мс (р<0,01). Таким образом, у пациентов основной группы с нормозооспермией не было выявлено достоверных отличий с контрольной группой по основным морфо-функциональным характеристикам эякулята, но обнаружены достоверные отличия по показателям ЛЗХЛ.

بر این اساس می توان نتیجه گرفت که نوعی "پاتوپرمی" در ناباروری وجود دارد که ایجاد آن با روشهای استاندارد تحقیقات انزال امکان پذیر نیست. تجزیه و تحلیل توانایی زیادی برای تولید ROS در اسپرماتوزوئیدها با ساختار مورفولوژیکی معیوب را نشان داد ، که به طور جداگانه تعیین نشده است ، اما با انواع دیگر پاتوپرمی ترکیب شده است. این شواهدی وجود دارد که ROS در مرحله بلوغ سلولهای زایا می تواند علت مستقیم پاتوپرمی باشد. مرحله بلوغ اسپرم در سطح اپیدیدیم انجام می شود. بیشترین تعداد بیماران مبتلا به پاتوسپرمیا اختلالات مختلفی در سطح اپیدیدیم از یک یا هر دو طرف داشتند ؛ بنابراین ، عملکرد عوامل پاتولوژیک در سطح اپیدیدیم منجر به تشکیل اشکال پاتولوژیک اسپرم می شود ، که متعاقباً اثر مخربی روی اشکال کامل تر دارد. این امر به صورت افزایش محتوای اشکال بی حرکت اسپرم در انزال با سطح بالای FRO آشکار می شود.

این مطالعه توانایی پلاسمای اسپرم را در مهار درخشش سیستم مدل نشان می دهد. این پدیده اثر مهاری مایع بیولوژیکی بر تولید ROS را می توان با وجود آنتی اکسیدان در آن توضیح داد ، که از تشکیل رادیکال ها در فازهای مختلف واکنش زنجیره ای FRO جلوگیری می کند. پلاسمای اسپرم از بیماران در گروههای مطالعه و کنترل به همان میزان پارامترهای CC و MC سیستم مدل را تحت تأثیر قرار داد. بنابراین ، نقض فرآیندهای اکسیداسیون رادیکال های آزاد در انزال با افزایش تولید ROS توسط سلول ها (اسپرماتوزوئیدها و لکوسیت ها از نظر مورفولوژیکی و عملکردی غیر طبیعی) همراه است ، در حالی که در صورت عدم آسیب به غدد جنسی ، فعالیت آنتی اکسیدانی کل ثابت است.

مطالعه بخشهای مایع منی در فرآیندهای FRO ، شناسایی مشارکت آنها در CL برای روشن کردن دلایل منجر به نقض حالت FRO در برخی از nosologies ها ، مطابق با استانداردهای WHO مورد ارزیابی قرار گرفت. افزایش شاخص های اصلی LZHL رسوب و انزال کامل در مردان نابارور در مقایسه با گروه کنترل مشاهده شد. در مطالعه کل AOA پلاسمای منی در این گروهها اختلاف معنی داری مشاهده نشد. طبق ادبیات ، درصد اجزای حجمی انزال تشکیل شده در بیضه ها به طور متوسط \u200b\u200b5٪ است. قسمت عمده ای از انزال روی آن تشکیل می شود

سطح غدد اضافی (غده پروستات ، وزیکولهای منی ، غدد کوپر) و عمدتا توسط قسمت مایع انزال (اسپرموپلاسم) نشان داده می شود. پلاسمای اسپرم قسمت عمده ای از پتانسیل AO اسپرم را تشکیل می دهد. می توان فرض کرد که AOA پلاسمای اسپرم بر تشکیل سلولهای زایا تأثیر نمی گذارد ، زیرا تشکیل حجم اصلی پلاسمای اسپرم در سطح غدد جنسی لوازم جانبی اتفاق می افتد. اسپرماتوزهای نابالغ با افزایش توانایی تولید ROS می توانند تاثیری مخرب بر سلولهای زایای کامل داشته باشند تا اینکه سلولهای بعدی با قسمت عمده ای از پلاسمای اسپرم که منبع اصلی آنتی اکسیدان ها در انزال است مخلوط شوند. با توجه به اینکه از نظر سطح کل AOA هیچ تفاوتی بین گروههای اصلی و کنترل وجود نداشت و سطح پارامترهای شیمیایی لامپینسانس تعیین شده (CC ، CPS ، MS) به طور قابل توجهی متفاوت بود ، می توان نتیجه گرفت که ROS نقشی در پاتوژنز ناباروری مردان دارد و استفاده از داروهای آنتی اکسیدانی از نظر بالینی موجه است. ... به منظور دستیابی به رویکردی متفاوت برای درمان آنتی اکسیدانی ناباروری مردان ، توصیه می شود ابتدا وضعیت رادیکال های آزاد تعیین شود. در صورت عدم تعادل در فرآیندهای اکسیداسیون ، لازم است که تولید ROS را اصلاح کنید ، بسته به محلی سازی ضایعه ، یا در سطح اپیدیدیم یا در سطح غدد جنسی عمل می کند.

بنابراین ، بر اساس تعمیم داده های ادبیات و نتایج مطالعات خودمان ، می توان نتیجه گرفت که ROS نقش مهمی در پاتوژنز ناباروری مردان دارد. یک روش سریع سریع برای تعیین ROS در منی ، براساس ثبت CL ، ایجاد شده است. ارزیابی سطح فعالیت آنتی اکسیدانی در پلاسمای اسپرم انجام شد. اثربخشی استفاده از روشهای تحقیق شیمی لومینسانس به عنوان یک معیار اضافی برای ارزیابی باروری مردان از نظر بالینی اثبات شده است. مکانیسم های بیماری زایی برای درمان برخی از انواع ناباروری مردان با آنتی اکسیدان ها مشخص شده است.

1. ایجاد و آزمایش در شرایط بالینی ، رویکردی جامع برای شناسایی ناباروری مردان ، براساس ارزیابی وضعیت اکسیداسیون رادیکال های آزاد در انزال با تعیین تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر در مایع منی و فعالیت آنتی اکسیدانی در پلاسمای اسپرم.

2. شرایط بهینه برای اندازه گیری گونه های اکسیژن واکنش پذیر با استفاده از روش ثبت شیمی لومینسانس وابسته به لومینول انزال و تعیین فعالیت آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم در یک سیستم مدل تولید کننده انواع اکسیژن فعال انتخاب شد.

3. به طور معمول ، اسپرم با توانایی کم در تولید گونه های اکسیژن واکنش پذیر مشخص می شود و پلاسمای اسپرم دارای فعالیت آنتی اکسیدانی بالایی است.

4. در پاتولوژی (ناباروری مردان) ، افزایش شدت اکسیداسیون رادیکال های آزاد در انزال به دلیل افزایش تولید گونه های اکسیژن فعال توسط اسپرم های معیوب عملکردی در برابر پس زمینه فعالیت آنتی اکسیدانی بدون تغییر پلاسمای اسپرم ، در صورت عدم وجود التهاب در ناحیه دستگاه تناسلی ، وجود دارد.

5- روش ثبت لومینسانس خود به خود وابسته به لومینول انزال و تعیین فعالیت کل آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم یک معیار اضافی موثر برای ارزیابی ناباروری مردان ، همراه با روش های سنتی تحقیقات بالینی و آزمایشگاهی است.

1. روش پیچیده توسعه یافته مطالعه شیمی لومینسانس تولید گونه های اکسیژن فعال در انزال و تعیین کل فعالیت آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم توصیه می شود برای ارزیابی ناباروری مردان در اورولوژی بالینی ، به عنوان یک روش تشخیصی اضافی موثر استفاده شود.

قبل از اندازه گیری لومینسانس ، 1/0 میلی لیتر از اسپرم مورد آزمایش باید با 2 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی حاوی لومیول (5-آمینه-2،3-دی هیدرو-1،4-فتالازیندیون) در غلظت نهایی 10-5 M مخلوط شود ، کاملا مخلوط شود و شیمی لومینسانس ثبت شود. در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه.

این مطالعه را می توان طی 1 ساعت پس از روانگرایی انجام داد.

با یک مقدار نور بالاتر از 2.8 ± 0.8 spn واحد ، حتی با یک "لکوسیت" هنجاری ، لازم است سلول ها را با سانتریفوژ ایزوپنوتیک در یک شیب تراکم با

تعیین بعدی سطح وابسته به لومینول

شیمی لومینسانس

Ficoll / Hypaque به عنوان شیب تراکم استفاده می شود: 20 میلی لیتر 9٪ فیکول + 10.0 میلی لیتر 50٪ هیپاک ؛ تراکم 1.12 گرم در میلی لیتر pH شیب آماده شده به 5/7 تنظیم می شود. برای جداسازی سلولها ، 1 میلی لیتر از انزال روی 1 میلی لیتر از شیب آماده شده لایه لایه شده و در 500 گرم به مدت 20 دقیقه سانتریفیوژ می شود.

به عنوان یک سیستم مدل ، 20 میلی لیتر از بافر فسفات (KH2P04 - 20 میلی متر ، KC1 - 105 میلی متر) همراه با سیترات (50 میلی متر) و لومینول (10-5 میلی متر) استفاده می شود. جریان تاریک به مدت 10 ثانیه ثبت می شود و پس از آن XJI آغازگر معرفی می شود - 1 میلی لیتر محلول سولفات آهن 50 میلی مولار (FeS047H20). درخشش در عرض 5 دقیقه ثبت می شود.

پلاسمای اسپرم حاصل از سانتریفیوژ مایع منی در حجم 1/0 میلی لیتر باید به سیستم مدل اضافه شود. جریان تاریک به مدت 10 ثانیه ثبت می شود و پس از آن XJI -1 میلی لیتر از محلول 50 میلی متر سولفات آهن اضافه می شود. کنسانتره نهایی "سولفات آهن در محیط جوجه کشی 5/2 تن است. ضبط درخشش به مدت 5 دقیقه با هم زدن مداوم انجام می شود.

خواص آنتی اکسیدانی پلاسمای اسپرم به عنوان درصدی از مهار لومینسانس MS تخمین زده می شود ، وقتی که طبق آخرین فرمول به آخرین پلاسمای اسپرم اضافه شود:

S AOA \u003d 100٪ - (SMC - SMCCn) / SMC g 100٪ ،

جایی که SAOA کل فعالیت آنتی اکسیدانی است.

SMC حاصل جمع سیستم مدل است.

SMCCn - مجموع سبک سیستم مدل + پلاسمای اسپرم.

4- استفاده از داروهای آنتی اکسیدان در درمان ناباروری مردان با افزایش تولید گونه های اکسیژن واکنشی در انزال ، همراه با افزایش شدت شیمی لومینسانس وابسته به لومینول اسپرم ، یا کاهش فعالیت آنتی اکسیدانی کل پلاسمای اسپرم ، که با سرکوب لومینسانس سیستم مدل ارزیابی می شود ، توصیه می شود.

1. روش های ارزیابی عملکرد تولید مثل مردان. - اوفا: بهداشت و درمان باشقورتستان ، 2001. - 48 ص. (هم نویسندگان: R.R. Farkhutdinov، Sh.N. Galimov، F.K. Kamilov، E.F. Agletdinov، Kh.G. Valeeva، A.P. Goloshchapova، N.Y. Simonova،

B.I. Ivaha)

2. روش ثبت شیمی لومینسانس برای ارزیابی باروری مردان // فناوری های پزشکی جدید: مواد اولین کنگره بین المللی. - SPb. ، 2001. - ص 62. (هم نویسندگان: R.R. Farkhutdinov، R.R.Sadykov)

3. بهداشت باروری مردان به عنوان شاخص بیماری زیست محیطی "/ درمان ناباروری: مشکلات حل نشده: مجموعه مقالات علمی - ساراتوف ، 2001. - ص 15-16 ، (نویسندگان مشترک: Sh.N. Galimov F.Kh Kamilov، E. F. Agletdinov، H. G. Valeeva، V. I. Ivaha)

4. تأثیر گونه های اکسیژن واکنشی بر باروری مردان. // سوال پزشکی نظری و عملی: مواد شصت و ششمین کنفرانس علمی جمهوری خواه دانشجویان و دانشمندان جوان BSMU. - اوفا ، 2001 ، -

5. اکسیداسیون رادیکال آزاد در پاتوژنز ناباروری مردان /. رادیکال های آزاد ، آنتی اکسیدان ها و بیماری های انسانی: مجموعه مقالات یک کنفرانس علمی و عملی با مشارکت بین المللی. - Smolensk، 2001. -S. 176-177. (نویسندگان مشترک: آر. آر. فرخوتدینوف ، آر. آر. سادیکوف)

6. گونه های اکسیژن واکنش پذیر در انزال // بهداشت عمومی باشکورتوستان -2001. - خاص شماره X "5.: موارد اضطراری در اورولوژی. - ص 92. (هم نویسنده R.R.Sadykov R.R. Farkhutdinov، M.A. Nartailakov)

7. ارزیابی سلامت باروری کارگران مرد یکی از بنگاه های اقتصادی در تویمازی // بهداشت و درمان باشقورتستان. - 2001. - ویژه. شماره شماره 8 ■ P.28-32. (نویسندگان مشترک: A.V. ، Varshavsky ، E.F. Agletdinov ، M.I. Pavlov ، A.A. Rakchaev

8. ارزیابی خطر بهداشت باروری مردان در جمهوری باشکورتستان // مشکلات ادغام علوم ، آموزش و صنایع در منطقه جنوبی جمهوری باشکورتستان: مجموعه مقالات علمی همتای علمی عملی عملی. - Ufa: Kzd-vo "Tilem" ، 2001. - S. 13-16. (نویسندگان مشترک Sh.N. Galimov ، F.K. Kamilov ، EF.Agletdinov ، Kh.G. Valeeva ، A.P. Goloshchaposh I.I.Simonova ، A.R. Mavzyutov ، V.I. Ivaha)

9. آلودگی انسانی محیط زیست و بهداشت باروری مردان // بوم شناسی شیمیایی: مواد مدرسه-سمینار. - اوفا ، 2001. س. 163-166. (نویسندگان مشترک: Sh.N. Galimov، F.K. Kamilov، EF Agletdinov)

10. تجزیه و تحلیل خطر برای سلامت باروری مردان در یک منطقه از نظر زیست محیطی نامساعد: معیارهای ارزیابی. // جنبه علمی] مشکلات زیست محیطی روسیه: خلاصه مقالات گزارش کنفرانس تمام روسی. - SPb. ، 200 -S. 140. (هم نویسنده / Sh.N. Galimov، F.K. Kamilov، E.F. Agletdinov، N.I.Simonov؛ Kh.G. Valeeva، P. Goloshchapov، V.I. Ivaha)

11 ، سندرم کمبود آندروژن به عنوان نشانگر آلودگی فن آوری محیط // مشکلات تولید مثل ، - 2002. -T.8 ، №1 ، P.46-50. (نویسندگان مشترک: Sh.N. Galimov، F.Kh Kamilov، EF Agletdinov، Kh.G. Valeev A، P. Goloshchapov، V.I. Ivaha).

- [صفحه 2] -

عکس. 1. شایعترین شرایط پاتولوژیک در مردان از زوجین نابارور با تولید بیش از حد ROS.

به طور کلی ، تولید بیش از حد ROS ، طبق اطلاعات ما ، در 38.2 .2 از بیماران با اختلالات مختلف کیفیت اسپرم وجود دارد. در میان مردان با تولید بیش از حد ROS ، ما اغلب واریکوسل (38.9٪ موارد) و پروستاتیت باکتریایی مزمن را در مرحله التهاب فعال (25.1 of موارد) مشاهده کردیم. در 9/8 درصد مردان - کیست در ضایعات ، در 2/1 درصد - عدم وجود یک یا هر دو واز دفران.

در 52.2٪ موارد ، در برابر تولید بیش از حد ROS ، واکنشهای خود ایمنی علیه اسپرماتوزوئیدها ، همراه با تولید ASAT پیدا کردیم (شکل 1).

در برابر پس از تولید بیش از حد ROS ، normospermia در 19.3 موارد تشخیص داده شد. بنابراین ، ما دریافتیم که استرس اکسیداتیو در 7/80 درصد موارد با کاهش کیفیت اسپرم همراه است. علاوه بر این ، آدنوزواسپرمی اغلب مشاهده شد - 4/71 درصد موارد ، سپس تراتوزواسپرمیا - 3/36 درصد ، الیگوزواسپرمیا - 3/28 درصد ، پیروسپرمی - 3/21 درصد ، ناباروری ایمنی ، درصورتی که بیش از نیمی از اسپرماتوزایای متحرک با آنتی بادی پوشانده شوند ، - 10/6 درصد ؛ در 5٪ موارد - آزواسپرمی. لازم به ذکر است که ترکیبی از چندین تشخیص معمولاً انجام می شود. نقض پاسخ آکروزومی در برابر استرس اکسیداتیو در بیش از نیمی از موارد مشاهده شد. با در نظر گرفتن فراوانی زیاد وقوع برخی شرایط پاتولوژیک در مردان از زوجین نابارور ، وظیفه فوری نیاز به کشف میزان خطر استرس اکسیداتیو در برابر عوامل مختلف etiopathogenetic بود (شکل 2).

ما دریافتیم که بیماری های عفونی و التهابی اندام های تولید مثل مردان ، به ویژه پروستاتیت باکتریایی مزمن ، در 64.1٪ موارد منجر به استرس اکسیداتیو اسپرم می شود ، خطر نسبی آن 2.9 است. در برابر ناباروری ایمنی ، خطر مطلق استرس اکسیداتیو 40.2-71.0٪ ، خطر نسبی 1.5-2.9 است (بسته به مقدار ASAT). در واریکوسل ، خطر مطلق استرس اکسیداتیو در اسپرم به ترتیب 29.3-68.1.1، ، نسبی - 1.6-2.6 بود.

بنابراین ، مهمترین علل ایجاد استرس اکسیداتیو پروستاتیت باکتریایی مزمن در مرحله التهاب فعال ، واکنشهای خودایمن در برابر اسپرماتوزوئید و واریکوسل بود. این شرایط پاتولوژیک اغلب در ناباروری مردان تشخیص داده می شود ، و در برابر پس زمینه آنها خطر ابتلا به استرس اکسیداتیو وجود دارد.

ما ویژگی های استرس اکسیداتیو را در گروه هایی با علل مختلف کاهش باروری بررسی کردیم. ما متوجه شدیم که با واریکوسل (294 \u003d n) ، تولید ROS 0.48 + 0.40 میلی ولت بر ثانیه با انتشار انفرادی مقادیر از 0.01 تا 66.15 میلی ولت بر ثانیه بود که 1.9 برابر بیشتر از بیماران بارور در غیاب ACAT و 8 بار در حضور واکنشهای خود ایمنی.

شکل 2 خطر مطلق استرس اکسیداتیو اسپرم در فاکتورهای مختلف etiopathogenetic ناباروری مردان . توجه داشته باشید:*** - تفاوت در مقایسه با گروه مردان بارور با آزمون مجذور کای با p قابل توجه است<0,001

در همان زمان ، تجزیه و تحلیل همبستگی رابطه ای بین شدت واریکوسل ، از یک طرف و سطح ROS در مایع منی ، از سوی دیگر نشان نداد (R \u003d -0.004؛ gamma \u003d -0.004؛ t \u003d -0.003؛ p\u003e 0.05).

ما ویژگی های تولید ROS در انزال مردان با انواع مختلف واریکوسل را تجزیه و تحلیل کردیم. ما متوجه شدیم که تولید بیش از حد رادیکال های فعال در شکل تحت بالینی اتساع رگ های طناب اسپرماتیک در 31.2٪ موارد ، در اولین مورد - 33.9، ، در دوم - 25.5، ، 42.9 - - در سوم. بنابراین ، از نظر آماری اختلاف معنی داری در بروز تولید بیش از حد گونه های اکسیژن واکنش پذیر مشاهده نشد (05/0\u003e p).

بر اساس داده های ما ، هنگام معاینه مردان از زوج های نابارور به منظور شناسایی اشکال تحت بالینی واریکوسل ، سونوگرافی اندام های بیضه اجباری است. تشخیص ثابت واریکوسل نشانه ای مطلق برای تعیین سطح ROS است.

در برابر تولید بیش از حد ROS در واریکوسل ، از نظر ما ، درمان جراحی بدون در نظر گرفتن درجه واریکوسل نشان داده شده است.

با همان درجه انبساط وریدهای طناب اسپرماتیک ، تولید ROS با افزایش مدت زمان ناباروری افزایش می یابد (p<0,04-0,01); в среднем по группам у пациентов с варикоцеле степенью +1 при продолжительности бесплодия от 12 до 36 мес. она составляла 0,39+0,23 мВ/с, при бесплодии больше 36 мес – 0,64+0,45 мВ/с (p<0,05). Исходя из этого, прогноз оперативного лечения в раннем возрасте в плане восстановления фертильности более благоприятный, а выжидательная тактика ведения пациентов с варикоцеле не является обоснованной, учитывая высокий риск оксидативного стресса.

در برابر پروستاتیت مزمن (130 نفر) ، ما وابستگی مستقیمی در تولید رادیکال های اکسیژن فعال به تعداد لکوسیت ها در ترشح پروستات ایجاد کردیم (0.24 \u003d R \u003d 0.24 \u003d R). با افزایش تعداد لکوسیت ها در ترشح پروستات ، در 36.1٪ موارد پیوسپرمیا مشاهده شد. وابستگی تولید ROS به غلظت لکوسیت ها در اسپرم (0.29 R \u003d ؛ p.)<0,00001) сильнее, чем от содержания лейкоцитов в секрете простаты.

بیماران مبتلا به پیوسپرمی با محتوای بالای ROS در مایع منی مشخص می شوند: به طور متوسط \u200b\u200bدر گروه ، تولید 9.81 +/- 25.56 میلی ولت بر ثانیه بود (با رد مقادیر + 3S - 1.15 + 1.34 میلی ولت بر ثانیه) گسترش فردی از 0.07 به 153.50 mV / s ؛ متوسط \u200b\u200b0.925 میلی ولت بر ثانیه است ، دامنه مقادیر اسیر از 0.07 تا 9.52 میلی ولت بر ثانیه است که به طور قابل توجهی بالاتر (3.9 برابر) از مردان بارور است (p<0,001).

همبستگی معنی داری بین غلظت لکوسیتها در اسپرم و شدت باکتریوسپرمیا (R \u003d 0.23؛ p \u003d 0.033) ، شدت باکتریوسپرمیا و تولید ROS وجود دارد (r \u003d 0.35؛ p<0,01).

بر اساس داده های به دست آمده ، رابطه مثبتی بین تولید ROS و آگلوتیناسیون اسپرم در مردان از زوج های نابارور مبتلا به پاتوزواسپرمی ایجاد کردیم. علاوه بر این ، هنگامی که نمونه های دارای پیوسپرمی حذف شدند ، ضریب همبستگی به طور قابل توجهی کاهش یافت: R \u003d 0.13 (p\u003e 0.05) ، گاما \u003d 0.30 (p \u003d 0.05).

حذف از تجزیه و تحلیل نمونه هایی با غلظت اسپرم کمتر از 10 میلیون در میلی لیتر و مواد پرت (2S +) تعیین دقیق تر تولید ROS و فعالیت واکنش های خود ایمنی را امکان پذیر کرد. تحت این شرایط ، در مردان مبتلا به پروستاتیت مزمن همراه با pyospermia ، تولید ROS 8.8 برابر بیشتر از موارد بارور است ، و یک بارزتر (R \u003d 0.44) نسبت به کل نمونه وجود دارد ، رابطه بین محتوای ROS در مایع منی و لکوسیت ها ...

نقش فرآیند التهابی در افزایش تولید ROS در منی توسط نتایج آنتی بیوتیک درمانی برای پروستاتیت مزمن تأیید می شود (جدول 1). نشان داده شد که پس از 2 هفته درمان در برابر کاهش تعداد لکوسیتها در ترشح پروستات به میزان 39.1٪ (p<0,01) и на 35,2% в сперме (p>0.05) ، بیش از یک کاهش دو برابری در تولید ROS رخ می دهد (58/1٪ - p.)<0,05). Одновременно происходит улучшение жизнеспособности (p<0,05) и подвижности (p<0,05), нормализация акросомальной реакции сперматозоидов в виде уменьшения доли гамет, преждевременно утративших целостность акросомальной мембраны (p<0,05), а у пациентов с АСАТ – снижение процента MAR-позитивных сперматозоидов (p<0,01).

بنابراین ، تجزیه و تحلیل داده های معاینه مردان از زوج های نابارور مبتلا به پروستاتیت نشان داد که افزایش تعداد لکوسیت ها در اسپرم در برابر پروستاتیت منبع اصلی تولید بیش از حد گونه های اکسیژن واکنش پذیر است ، منجر به استرس اکسیداتیو و تغییر در ویژگی های عملکردی اسپرم ها می شود.

در نیمی از بیماران (5/51 درصد) از زوجین نابارور مبتلا به پیوسپرمیا ، ACAT یافت شد ، اما تنها در 2/9 درصد آنها بیش از 50 درصد اسپرمهای متحرک را تحت پوشش قرار دادند.

هیچ ارتباطی بین غلظت لکوسیتها در اسپرم و درصد سلولهای اسپرم متحرک ACAT مثبت وجود ندارد (R \u003d 0.0؛ p\u003e 0.05).

ما دریافتیم که تولید رادیکال های آزاد بیشتر از میزان درصد گامت های MAP مثبت تحرک (0.44 \u003d R) به میزان آنتی بادی های موجود در اسپرم بستگی دارد (R44 / 0 \u003d R) ، تعیین شده با استفاده از روش PCM ، که توصیه می کنیم دقیق تر باشد توصیف فعالیت فرآیندهای خود ایمنی در انزال.

ما ویژگی های تولید ROS را در اشکال مختلف پاتوسپرمیا تجزیه و تحلیل کردیم. تجزیه و تحلیل همبستگی شاخص های اسپرموگرام در بیماران مبتلا به تراتوزواسپرمی رابطه ای بین درصد اشکال پاتولوژیک و تولید ROS نشان نداد. با این حال ، رابطه ای بین درصد اسپرماتوزوئید با گردن تغییر یافته و تولید ROS و عدم وجود ACAT وجود دارد: r \u003d 0.2؛ پ<0,01. Также в этой выборке обнаружена положительная корреляция между продукцией АФК и процентом сперматозоидов, спонтанно претерпевших акросомальную реакцию: r=0,24; p<0,05 для группы пациентов с нормальной концентрацией сперматозоидов и лейкоцитов.

افزایش سطح ROS در تراتوزواسپرمی را می توان با انتشار رادیکالهای فعال با آسیب به غشای اسپرم ، احتباس سیتوپلاسم و بالعکس توضیح داد ، که به احتمال زیاد نتیجه تولید گامتهای معیوب از نظر مورفولوژی است. در این حالت ، روند طبیعی واکنش آکروزومی مختل شده و آپوپتوز گامت با آسیب رساندن به یکپارچگی DNA آنها رخ می دهد (Aitken et al.، 1989؛ Saleh et al.، 2003؛ Jedrzejczak et al.، 2005؛ Deepinder F.، 2008).

اسپرماتوزوئیدهای تغییر یافته از نظر ریخت شناسی با DNA معیوب توانایی کمی در باروری تخمک دارند و در صورت بارداری ، احتمال ابتلا به ناهنجاری های ژنتیکی در جنین زیاد است.

میز 1

تغییر در تولید فاکتورهای اکسیژن فعال ، شاخص های اسپرموگرام ، واکنش آکروزومی ، درصد اسپرم مثبت ACAT و ترشح پروستات در طی درمان آنتی بیوتیکی پروستاتیت مزمن در مردان از زوج های نابارور (M + SE)

تولید هدفمند ROS توسط سلولهای زنده

همه ارگانیسم ها به مکانیسم های متنوعی برای تولید هدفمند ROS مجهز هستند. آنزیم NADPH-oxidase برای مدت طولانی شناخته شده است و به طور فعال سوپراکسید "سمی" تولید می کند ، که در پشت آن کل گامای ROS تولید می شود. اما تا همین اواخر ، این یک لوازم جانبی خاص از سلولهای فاگوسیتیک سیستم ایمنی بدن به حساب می آمد و نیاز به تولید ROS را با شرایط حساس محافظت در برابر میکروارگانیسم ها و ویروس های بیماریزا توضیح می داد. اکنون مشخص شده است که این آنزیم در همه جا وجود دارد. او و آنزیم های مشابه در سلول های هر سه لایه آئورت ، در فیبروبلاست ها ، سینوسیت ها ، غدد سلول ها ، سلول های گیاهی ، مخمر ، در سلول های کلیه ، سلول های عصبی و آستروسیت های قشر مغز O 2 یافت می شود - سایر آنزیم های موجود در همه جا تولید می شود: P-450 ، گاما گلوتامیل ترپپتیداز و لیست همچنان در حال رشد است. اخیراً مشخص شده است که همه آنتی بادی ها قادر به تولید H 2 O 2 هستند ، یعنی E. آنها همچنین مولد ROS هستند. طبق برخی تخمین ها ، حتی در حالت استراحت ، 10-15٪ از کل اکسیژن مصرف شده توسط حیوانات تحت یک الکترون کاهش می یابد و در شرایط استرس ، هنگامی که فعالیت آنزیم های تولید کننده سوپراکسید به شدت افزایش می یابد ، شدت کاهش اکسیژن 20٪ دیگر افزایش می یابد. بنابراین ، ROS باید نقش بسیار مهمی در فیزیولوژی طبیعی داشته باشد.